| LRIG3特异性RNA干扰真核表达载体的构建及稳定株筛选 |
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| 引用本文： | 蔡明俊,谢蕊繁,韩林,陈如东,王宝峰,叶飞,郭东生,雷霆.LRIG3特异性RNA干扰真核表达载体的构建及稳定株筛选[J].中华神经外科疾病研究杂志,2009,8(2):122-126. |
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| 作者姓名： | 蔡明俊 谢蕊繁 韩林 陈如东 王宝峰 叶飞 郭东生 雷霆 |
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| 作者单位： | 华中科技大学同济医学院附属同济医院神经外科,湖北,武汉,430022 |
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| 摘 要： | 目的构建LRIG3（leucine-rich repeats and immunoglobulin-like domains 3，LRIG3）基因特异的RNA干扰质粒，为探讨抑制LRIG3基因表达对脑胶质瘤细胞生物学行为调控的研究奠定基础。方法根据GenBank数据库提供的LRIG3基因核苷酸序列，选择设计2条能转录短发卡RNA（shRNA）的DNA序列，命名为LRIG3-shRNA1、LRIG3-shRNA2，同时设计1条非特异性序列作为阴性对照，命名为negative-shRNA。并与pGenesil2质粒载体连接，转化感受态大肠杆菌，挑选阳性克隆，抽取重组质粒，使用限制性内切酶SalⅠ酶切电泳，DNA测序鉴定。3种重组表达载体转染胶质瘤细胞系GL15细胞，用G418筛选后挑选单克隆并扩增获得稳定株。逆转录酶-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot分别在mRNA和蛋白水平上检测LRIG3的表达。结果重组质粒成功转化感受态大肠杆菌，经SalⅠ酶切琼脂糖凝胶电泳分析，结果表明寡核苷酸成功插入到预计位点，经测序鉴定，序列完全正确。G418筛选出稳定转染三种质粒的GL15细胞，转染pGenesil2-LRIG3-shRNA组细胞LRIG3 mRNA和蛋白表达明显低于转染pGenesil2-negative-shRNA组。结论成功构建针对LRIG3基因的特异性shRNA真核表达载体，转染细胞后可抑制LRIG3基因表达，为进一步研究其基因功能奠定了基础。
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| 关 键 词： | LRIG3基因 RNA干扰 脑胶质瘤细胞 载体构建 |
Construction of LRIG3 specific short-hairpin RNA expressing vector and screening of stably transfected cell done |
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| CAI Mingjun,XIE Ruifan,HAN Lin,CHEN Rudong,WANG Baofeng,YE Fei,GUO Dongsheng,LEI Ting.Construction of LRIG3 specific short-hairpin RNA expressing vector and screening of stably transfected cell done[J].Chinese Journal of Neurosurgical Disease Research,2009,8(2):122-126. |
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| Authors: | CAI Mingjun XIE Ruifan HAN Lin CHEN Rudong WANG Baofeng YE Fei GUO Dongsheng LEI Ting |
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| Institution: | (Department of Neurosurgery, Tongji Hospital, Tongji Medical College, Science and Technology of Huazhong University, Wuhan 430022, China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | LRIG3 gene RNAi Glioma cell Vector construction |
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