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| 人乳头瘤病毒E6E7基因重组腺病毒的构建及鉴定 | |
| 引用本文： | 潘巍巍,成海恩,赖国旗,易发平,马永平,宋方洲.人乳头瘤病毒E6E7基因重组腺病毒的构建及鉴定[J].第四军医大学学报,2006,27(24):2220-2222. |
| 作者姓名： | 潘巍巍 成海恩 赖国旗 易发平 马永平 宋方洲 |
| 作者单位： | 1. 重庆医科大学:生物化学与分子生物学教研室,重庆,400016 2. 重庆医科大学:实验动物中心,重庆,400016 3. 重庆医科大学:生物化学与分子生物学教研室,重庆,400016;重庆医科大学:教育部临床检验诊断学重点实验室,重庆,400016;重庆医科大学:重庆市生物化学与分子药理学重点实验室,重庆,400016 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金，重庆市教委资助项目，教育部春晖计划项目 |
| 摘 要： | 目的:利用AdEasy系统构建人乳头瘤-16(HPV-16)E6 E7基因重组腺病毒,并通过Western Blot方法检测E6E7蛋白的表达.方法:将质粒pET-32a( )-E6E7扩增、酶切获得E6E7片段插入腺病毒穿梭载体质粒pAdTrack-CMV的巨细胞病毒(CMV)启动子下游,构建重组穿梭载体pAdTrack-CMV-E6E7,线性化后与骨架载体AdEasy-1在细菌BJ5183内同源重组得到腺病毒质粒pAd-E6E7,经人胚肾293细胞包装后得到复制缺陷型重组腺病毒Ad-E6E7;用包装后的病毒上清再次感染293细胞,提取细胞中的蛋白,通过Western Blot方法检测E6E7蛋白的表达.结果:连接、重组后通过酶切和测序法筛选出pAd-E6E7;经人胚肾293细胞包装,3 d后观察到绿色荧光蛋白(GFP)明显表达,氯化铯梯度离心纯化最终获得6.9×1010 pfu/L滴度的重组病毒;用该滴度的Ad-E6E7重新感染人胚肾293细胞3 d后,提取细胞蛋白,Western Blot检测,E6E7有明显表达.结论:利用新型腺病毒载体AdEasy系统可在短期内制备同时表达GFP和E6E7的重组腺病毒Ad E6E7. |
| 关 键 词： | 人类乳头状瘤病毒 人 腺病毒科 |
| 文章编号： | 1000-2790(2006)24-2220-03 |
| 收稿时间： | 12 6 2005 12:00AM |
| 修稿时间： | 02 20 2006 12:00AM |
Construction and identification of recombinant adenoviruses carrying HPV-16 E6E7 |
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| PAN Wei-Wei,CHENG Hai-En,LAI Guo-Qi,YI Fa-Ping,MA Yong-Ping,SONG Fang-Zhou.Construction and identification of recombinant adenoviruses carrying HPV-16 E6E7[J].Journal of the Fourth Military Medical University,2006,27(24):2220-2222. | |
| Authors: | PAN Wei-Wei CHENG Hai-En LAI Guo-Qi YI Fa-Ping MA Yong-Ping SONG Fang-Zhou |
| Abstract: | |
| Keywords: | papillomavirus human adenoviridae |
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