| 含双顺反子绿色荧光蛋白人骨形态发生蛋白2表达载体的构建 |
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| 引用本文： | 苗军,刘春蓉,黄鸿超,夏群,石可松. 含双顺反子绿色荧光蛋白人骨形态发生蛋白2表达载体的构建[J]. 中国组织工程研究与临床康复, 2008, 12(24): 4615-4618 |
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| 作者姓名： | 苗军 刘春蓉 黄鸿超 夏群 石可松 |
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| 作者单位： | 1. 天津市天津医院脊柱外科,天津市,300211
2. 天津武警医学院病理学教研室,天津市,200162 |
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| 摘 要： | 目的:骨形态发生蛋白2是目前研究最为广泛、诱导成骨活性最强的骨形态发生蛋白之一.实验拟构建绿色荧光蛋白标记的人骨形态发生蛋白2(human Bone Morphogenetic Protein-2,hBMP2)真核表达载体,为在真核细胞的高效表达和基因治疗打下基础.方法:实验于2006-03/2007-03在天津医科大学卫生部激素与发育重点实验室完成.①实验材料:含完整人骨形态发生蛋白2基因片段的pcDNA3.1/CT-hBMP2质粒由李曦铭博士惠赠;双顺反子真核表达载体pSELECT-GFPzeo-MCS(Invivogen公司),Zeo(Invivogen公司):pTA2R-T Easy(鼎国生物技术有限公司).②实验过程及评估:以重组质粒pcDNA3.1/CT-hBMP2为模板,结合已设计好的特异性引物,采用聚合酶链反应方法亚克隆出人骨形态发生蛋白2目的片段,将该片段分别与克隆载体pTA2-T-easy和双顺反子真核表达载体pSELECT-GFPzeo-MCS连接,转化入感受态DH5α细胞中,通过筛选得到含有绿色荧光蛋白的蘑组表达载体pSELECT-GFPzeo-hBMP2,并进行测序鉴定.结果:①聚合酶链反应获得长度约1 216 bp的目的片段,与预期片段相符.②经与克隆载体pTA2-T-easy和真核表达载体pSELECT-GFPzeo-MCS连接,筛选及序列分析后,证实所插入目的片段与GenBank检索的骨形态发生蛋白2cDNA序列(NM-001200)100%匹配.结论:成功构建含双顺反子绿色荧光蛋白人骨形态发生蛋白2真核表达载体.
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| 关 键 词： | 骨形态发生蛋白质类 基因表达 绿色荧光蛋白质类 组织构建 双顺反子 绿色 荧光蛋白 人骨形态发生蛋白 表达载体的构建 eukaryotic expression vector bone morphogenetic protein fluorescent green 匹配 序列分析 检索 GenBank 预期 长度 结果 测序鉴定 筛选 α细胞 感受态 |
Construction of bicistronic green fluorescent protein-labeled pSELECT-GFPzeo-human bone morphogenetic protein 2 eukaryotic expression vector |
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| Miao Jun,Liu Chun-rong,Huang Hong-chao,Xia Qun,Shi Ke-song. Construction of bicistronic green fluorescent protein-labeled pSELECT-GFPzeo-human bone morphogenetic protein 2 eukaryotic expression vector[J]. Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research, 2008, 12(24): 4615-4618 |
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| Authors: | Miao Jun Liu Chun-rong Huang Hong-chao Xia Qun Shi Ke-song |
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