ATP和乙酰胆碱诱发豚鼠耳蜗外毛细胞内CICR的激光共聚焦研究

目的：运用激光共聚焦研究ATP和乙酰胆碱（ACh）对豚鼠耳蜗外毛细胞内游离钙离子浓度（[Ca^2＋]i）的影响以及诱发Ca^2＋介导的Ca^2＋释放（CICR）的可能机制。方法：用酶孵育机械分离法，分离豚鼠耳蜗外毛细胞（OHC），钙敏荧光探针Fluo-3染色后，用激光扫描共聚焦显微镜分别记录在细胞外液有钙或无钙条件下，加入ATP、ACh、斯里兰卡肉桂碱（Ryanodine）＋ATP（或ACh）和毒胡萝卜素（Thapsigargin）＋ATP（或ACh）后的OHC的[Ca^2＋]，的变化。结果：在含钙的细胞外液中，ATP、Ryanodine＋ATP、Thapsigargin＋ATP、ACh、Ryanodine＋ACh和Thapsigargin＋ACh均可引起[Ca^2＋]，升高，引起明显的波峰，荧光强度相对峰值分别为1．60±0．01（ATP）、1．644±0．005（Ryanodine＋ATP）、1．491±0．005（Thapsigargin＋ATP）、1．43±0．01（ACh）、1．58±0．02（Ryanodine＋ACh）、1．398±0．003（Thapsigargin＋ACh）；而在不含钙的细胞外液中，ATP和Ryanodine＋ATP仍可引起[Ca^2＋]。出现幅度较小的波峰，分别为1．341±0．006和1．386±0．008，而ACh,Ryanodine＋ACh、Thapsigargin＋ACh和Thapsigargin＋ATP未引起明显[Ca^2＋]，波峰出现，其中ACh不能引起[Ca^2＋]．的升高，Ryanodine＋ACh、Thapsigargin＋ACh和Thapsigargin＋ATP分别引起[Ca^2＋]。缓慢升高。结论：在细胞外液有Ca^2＋的条件下．ATP和ACh引起OHC的[Ca^2＋]。升高，除了通过离子通道引起胞外Ca^2＋内流，还有IP。敏感钙库的释放和诱发CICR。在无Ca^2＋的条件下，ATP仍能诱发CICR，其机制可能是ATP促进IP3敏感钙库释放Ca^2＋，Ca^2＋又诱发了CICR，而ACh的反应是Ca^2＋依赖性的，在细胞外液无Ca^2＋的条件下，ACh不能引起IP。敏感钙库的释放和诱发CICR。

ATP and ACh induced CICR in outer hair cells of the guinea pig cochlea:study of confocal microscopy

Objective:Effects of ATP and acetylcholine(ACh) on intracellular Ca~(2+) concentrations([Ca~(2+)]_i) and possible mechanism of Ca~(2+)-induced Ca~(2+) release(CICR) of the isolated outer hair cells(OHCs) in the guinea pig cochlea were studied with confocal microscopy.Method:OHCs were isolated from guinea pig cochlea by enzymatic and mechanical methods.The effects of ATP,ACh,Ryanodine+ATP(or ACh) and Thapsigargin+ATP(or ACh) in the presence or absence of extracellular Ca~(2+) on [Ca~(2+)]_i in OHCs were exam...