| 结核分枝杆菌Rv0808基因的克隆、表达、纯化及抗原性研究 |
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| 引用本文： | 李自慧,杜博平,贾红彦,古淑香,邢爱英,周立娟,曹廷明,郑晓静,刘忠泉,杜凤娇,张宗德. 结核分枝杆菌Rv0808基因的克隆、表达、纯化及抗原性研究[J]. 北京医学, 2012, 34(9): 792-795,776 |
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| 作者姓名： | 李自慧 杜博平 贾红彦 古淑香 邢爱英 周立娟 曹廷明 郑晓静 刘忠泉 杜凤娇 张宗德 |
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| 作者单位： | 首都医科大学附属北京胸科医院北京市结核病胸部肿瘤研究所分子生物学实验室,101149;首都医科大学附属北京胸科医院病理科,101149 |
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| 基金项目： | “艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治”科技重大专项，北京市优秀人才培养资助项目 |
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| 摘 要： | 目的克隆、表达和纯化结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)体内诱导基因Rv0808,并制备多克隆抗体,研究其编码蛋白的抗原性,了解诊断应用价值。方法高保真PCR扩增Rv0808基因,克隆入表达载体pET-30a(+)后转化大肠杆菌BL21(DE3),测序正确的克隆用IPTG诱导表达。用镍柱纯化重组蛋白,然后用纯化蛋白免疫新西兰白兔,制备和纯化多克隆抗体。将重组蛋白分别与多克隆抗体和结核病患者血清进行Western blot鉴定,并尝试用多克隆抗体进行免疫组化染色检测巨噬细胞中M.tb。结果成功构建了pET-30a(+):Rv0808重组表达载体。经过重组蛋白的可溶性表达及纯化后,SDS-PAGE结果显示在66kD处有一单一蛋白条带。将此蛋白免疫新西兰白兔后获得了效价为6400的多克隆抗体。重组蛋白与多克隆抗体可以发生免疫反应,但却不能检测出结核患者血清中的相应抗体。用此多克隆抗体也无法检测出巨噬细胞中的M.tb。结论结核分枝杆菌Rv0808编码蛋白具有良好的免疫反应性和免疫原性,但可能对于结核病的诊断价值较小。
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| 关 键 词： | 结核分枝杆菌 抗原 诊断 |
Cloning, expression, purification and antigenicity research of Mycobacterium tuberculosis Rv0808 gene |
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| Affiliation: | LI Zi-hui, DU Bo-ping, JIA Hong-yan, et al (Department of Molecular Biology, Beijing Chest Hospital, Capital Medical University, Beijing Tuberculosis and Thoracic Tumors Research Institute, Beijing 101149) |
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