芳樟醇调控Nrf2/HO-1抑制黄曲霉毒素B1所致肝损伤的实验

目的 探讨芳樟醇对黄曲霉毒素B₁（AFB₁）诱导的大鼠急性肝损伤的保护作用，并初步探讨其保护机制。方法 20只雄性SPF级SD大鼠，采用随机数字表法分为3组：正常组（n=6），AFB₁组（n=7），芳樟醇组（n=7）。预防性给予芳樟醇溶液（200 mg·kg^-1）持续14 d，正常组和AFB1组给予等体积双蒸水灌胃。芳樟醇预防性给药结束后，连续2 d腹腔注射AFB₁（1 mg·kg^-1，溶于生理盐水）溶液，以建立大鼠急性肝损伤模型。模型建立14 d后进行样本采集和处理。苏木素-伊红（HE）染色和马松（Masson）染色观察大鼠肝组织病理学改变；生化检测各组大鼠的丙氨酸氨基转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、γ-谷氨酰转移酶（GGT）、乳酸脱氢酶（LDH）、碱性磷酸酶（ALP）、总胆红素（TBil）、直接胆红素（DBil）和间接胆红素（IBil）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽（GSH）和肝组织中的Fe³⁺和Fe²⁺含量；蛋白免疫印迹法（Wester blot）检测核转录因子红系2相关因子2（Nrf2）和血红素氧合酶-1（HO-1）蛋白的表达水平；分子对接技术验证芳樟醇与Nrf2/HO-1信号通路关键蛋白之间的结合性能；分子动力学技术验证芳樟醇与Nrf2/HO-1信号通路关键蛋白结合能的稳定性和亲和力。结果 病理结果表明，与AFB1组比较，芳樟醇组肝脏结构趋向正常，蓝色胶原纤维显著减少；芳樟醇组的ALT、AST、GGT、LDH含量及ALP、TBil、DBil、IBil水平均显著降低（P<0.01），肝组织中的Fe³⁺和Fe²⁺含量及氧化应激产物MDA的水平显著降低（P<0.01）；抗氧化物质SOD水平、CAT含量和GSH含量则显著增加（P<0.01）；分子对接结果显示芳樟醇与Nrf2、HO-1靶点结合的分子对接能分别为-5.495 6、-5.199 4 kcal·mol^-1（1 cal≈4.186 J）；分子动力学结果显示芳樟醇与Nrf2、HO-1结合能与亲和力较强。Western blot结果显示芳樟醇组中Nrf2蛋白的表达水平明显升高（P<0.05），而HO-1蛋白的表达水平显著降低（P<0.01）。结论 芳樟醇可能通过调控铁死亡信号通路中的Nrf2/HO-1来抑制肝脏细胞铁死亡并调节肝脏氧化应激水平，从而实现对AFB₁诱导的急性肝损伤的保护作用。

Experimental Study on Regulation of Nrf2/HO-1 by Linalool to Inhibit Hepatic Injury Induced by Aflatoxin B1