基于“以方测证”理论从AMPK/mTOR/HIF-1/VEGF通路探讨雷公藤多苷诱导卵泡发育不良大鼠模型的中医证候属性

目的 采用雷公藤多苷诱导卵泡发育不良大鼠模型，基于“以方测证”理论从腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/缺氧诱导因子-1/血管内皮生长因子（AMPK/mTOR/HIF-1/VEGF）信号通路探索该模型的证候属性。方法 将48只具有规律动情周期大鼠随机分为正常组（n=8）和造模组（n=40），造模组大鼠连续灌胃雷公藤多苷混悬液（75 mL·kg^-1）30 d，造模后将其分为模型组、四物汤组（3.69 g·kg^-1）、右归饮组（3.11 g·kg^-1）、左归饮组（7.29 g·kg^-1）和归肾丸组（10.35 g·kg^-1），每组8只。相应药物干预14 d。巴氏染色检测各组大鼠动情周期变化；体视镜观察卵巢组织形态；苏木素-伊红（HE）染色观察卵巢组织病理学及卵泡计数；酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定血清促卵泡激素（FSH）、黄体生成素（LH）及雌二醇（E₂）含量；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测卵巢组织AMPK、mTOR、HIF-1、VEGF mRNA及蛋白表达。结果 与正常组比较，模型组大鼠动情周期紊乱，次级、成熟卵泡减少，闭锁卵泡增多，FSH、LH、AMPK mRNA及蛋白表达显著升高（P<0.01），E₂含量，mTOR、HIF-1、VEGF mRNA及蛋白表达显著降低（P<0.01）；与模型组比较，归肾丸组次级、成熟卵泡增多，闭锁卵泡减少，FSH、LH含量、AMPK mRNA表达及蛋白表达显著降低（P<0.01），E₂含量、mTOR、HIF-1、VEGF mRNA表达及蛋白表达显著升高（P<0.01）。与归肾丸组比较，四物汤组、右归饮组、左归饮组成熟卵泡数量显著减少，闭锁卵泡数量显著增多（P<0.01）；四物汤组、右归饮组、左归饮组LH显著升高（P<0.01），FSH明显升高（P<0.05），E₂明显降低（P<0.05）；右归饮组AMPK蛋白表达明显升高（P<0.05），mTOR和HIF-1 mRNA表达显著降低（P<0.01），VEGF蛋白及mRNA表达显著降低（P<0.01）；四物汤组mTOR和HIF-1 mRNA，VEGF蛋白及mRNA表达明显降低（P<0.05）；左归饮组mTOR mRNA和VEGF蛋白及mRNA表达明显降低（P<0.05）。结论 归肾丸可以抑制AMPK/mTOR/HIF-1/VEGF通路来改善卵泡发育不良大鼠模型的卵巢功能、促进卵泡成熟，且总体疗效优于左归饮、右归饮和四物汤，表明该模型的证候更符合肾精亏虚证。