基于TRPV1探讨黄五甘附膏治疗膝骨关节炎外周炎性痛敏的作用机制

目的 观察黄五甘附膏对阳虚寒凝证膝骨关节炎（KOA）大鼠滑膜组织瞬时受体电位锚蛋白1（TRPV1）受体表达、巨噬细胞极化及p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）信号通路调控作用，探讨其缓解KOA外周炎性痛敏的作用机制。方法 48只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、黄五甘附膏高、中、低剂量组（9.3、4.65、2.325 g·kg^-1）、塞来昔布组（208.2 mg·kg^-1），采用气候箱加游泳2周联合膝关节腔注射碘乙酸钠（MIA）建立阳虚寒凝证KOA大鼠模型，连续给药4周，观察各组大鼠一般情况，记录机械刺激缩足痛阈值（PWT）和关节直径，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、神经生长因子（NGF）和降钙素基因相关肽（CGRP）炎性因子表达；苏木素-伊红（HE）染色观察膝关节滑膜组织病理学改变；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠膝关节滑膜组织TRPV1、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达水平；免疫荧光（IF）测量评估M1/M2巨噬细胞极化情况。结果 与空白组比较，模型组大鼠整体精神状态较差，自主活动减少，体质量偏低，关节直径增加，X射线提示关节边缘骨赘增生，关节面明显粗糙，关节腔间隙明显变窄，大鼠PWT显著降低（P<0.01），大鼠血清IL-1β、TNF-α、CGRP、NGF含量均显著升高（P<0.01），滑膜Krenn评分显著升高（P<0.01），TRPV1、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达显著升高（P<0.01），M1巨噬细胞占比和M1/M2显著升高（P<0.01），M2巨噬细胞占比显著降低（P<0.01）；与模型组比较，黄五甘附膏低、中、高剂量体质量有不同程度上升（P<0.05，P<0.01），黄五甘附膏高剂量组和塞来昔布组大鼠膝关节直径减少（P<0.01），黄五甘附膏高、中剂量组PWT恢复较为明显（P<0.05），各给药组大鼠血清IL-1β和CGRP的含量都显著降低（P<0.01），塞来昔布组和黄五甘附膏高剂量组大鼠血清TNF-α含量明显降低（P<0.05），黄五甘附膏中剂量组大鼠血清NGF含量明显降低（P<0.05），黄五甘附膏高剂量组滑膜Krenn评分明显降低（P<0.05），黄五甘附膏各剂量组大鼠滑膜组织中TRPV1和p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达都显著下降（P<0.01），塞来昔布组和黄五甘附膏各剂量组滑膜组织中M1巨噬细胞占比均降低（P<0.01），黄五甘附膏高剂量组M2巨噬细胞占比升高（P<0.05），黄五甘附膏中、高剂量M1/M2降低（P<0.05）。结论 黄五甘附膏可通过调控巨噬细胞极化减轻KOA炎症反应，减少炎性疼痛介质释放，同时还降低了TRPV1蛋白表达，其机制可能与p38 MAPK信号通路有关，从而达到改善KOA外周痛敏的效应。

Mechanism of Huangwu Ganfu Ointment in Treatment of Peripheral Inflammatory Hyperalgesia of Knee Osteoarthritis Based on TRPV1