黄芪-莪术基于C5a/NETs途径抑制Lewis肺癌小鼠肿瘤转移的机制

目的 基于补体C5a/C5a受体（C5aR）对中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）形成的调控机制，探讨黄芪-莪术（HQ-EZ）改善高凝状态、抑制肿瘤生长转移的机制。方法 40只雄性C57BL/6小鼠随机分为4组，其中设空白组，另外3组建立Lewis肺癌小鼠模型后分为模型组、黄芪-莪术组、PMX53组，每组各10只。建模后第3天开始给药，中药组按8.2 g·kg^-1剂量连续14 d给予中药浓煎液灌胃，PMX53组分别于第3、6、9、12、15天按1 mg·kg^-1剂量给予腹腔注射PMX53；每2 d测量小鼠体质量和肿瘤长短径，末次给药次日各组小鼠行活体肺部microCT检测转移瘤情况，麻醉后眼球取血，处死剖取肺脏、瘤块，观察肺脏大体情况，称取瘤重计算抑瘤率，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清和肿瘤组织中补体C5a、中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）、瓜氨酸化组蛋白-H3（Cit-H3）、髓过氧化物酶（MPO）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、NETs、血管性血友病因子（vWF）、组织因子（TF）、P-选择素含量，原位末端转移酶标记法（TUNEL）检测肿瘤组织细胞凋亡情况，苏木素-伊红（HE）染色观察肺内转移情况，免疫荧光（IF）观察肿瘤组织内NETs等的表达情况，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肿瘤组织C5aR、MPO、Cit-H3蛋白表达情况。结果 与空白组比较，模型组肺内可见肿块，肺内X射线透射度低区域增多，模型组肺脏大体可见结节灶及多处出血灶，整体肺脏颜色较深；小鼠血清补体C5a、NETs及相关蛋白、vWF、TF、P-选择素水平显著增高（P<0.01）。与模型组比较，HQ-EZ组与PMX53组肺内转移灶数量较少，X射线透射度低区域相对较少，肺脏大体未见明显结节，整体肺脏颜色相对较浅；与模型组比较，两用药干预组肿瘤生长曲线较缓，瘤重显著降低（P<0.01），肿瘤细胞凋亡率显著升高（P<0.01），血清和肿瘤组织中补体C5a、NETs及相关蛋白、vWF、TF、P-选择素水平明显降低（P<0.05），补体C5aR、MPO、Cit-H3的蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。结论 黄芪-莪术通过抑制补体C5a/C5aR通路抑制了NETs的表达，进一步改善机体的高凝状态，起到抑制肿瘤生长转移的作用。

Astragali Radix-Curcumae Rhizoma Inhibits Metastasis of Lewis Lung Cancer in Mice via C5a/NETs Pathway