加味四妙散对急性痛风性关节炎大鼠miR-223-3p与NLRP3/IL-1β信号通路的影响

目的 通过研究加味四妙散对急性痛风性关节炎（AGA）大鼠模型miR-223-3p与NOD样受体蛋白3（NLRP3）/白细胞介素-1β（IL-1β）信号通路的影响，探讨加味四妙散对AGA的抗炎机制。方法 选取8周龄雄性SD大鼠72只，按随机数字表法分空白组、模型组、秋水仙碱组（0.3 mg·kg^-1）、加味四妙散高剂量组（31.75 g·kg^-1）、加味四妙散中剂量组（15.75 g·kg^-1）、加味四妙散低剂量组（7.875 g·kg^-1），每组12只，除空白组外，其余各组采用Coderre法于大鼠右侧踝关节注射单钠尿酸盐（MSU）晶体混悬液，复制急性痛风性关节炎大鼠模型，给药组分别给予相应药液灌胃，模型组和空白组给予等体积的无菌生理盐水溶液灌胃，连续1周。测量大鼠踝关节周径并计算踝关节肿胀度，苏木素-伊红（HE）染色法检测大鼠踝关节滑膜组织病理形态的变化，采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组大鼠血清中IL-1β、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）水平，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组大鼠滑膜组织中NLRP3、胱天蛋白酶-1（Caspase-1）、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）的蛋白表达，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠滑膜组织中NLRP3、Caspase-1、ASC mRNA的表达和miR-223-3p的表达。结果 与正常组比较，模型组大鼠踝关节肿胀度显著升高（P<0.01），滑膜组织结构紊乱，滑膜细胞增生明显，有大量炎症细胞浸润，大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著上升（P<0.01），NLRP3、Caspase-1、ASC的蛋白与mRNA表达增加，miR-223-3p的表达下降；与模型组比较，秋水仙碱组、加味四妙散高、中剂量组关节肿胀度明显降低（P<0.05），秋水仙碱组、加味四妙散高、中、低剂量组滑膜细胞增生及炎性细胞浸润较模型组均有不同程度减轻，其中秋水仙碱组和加味四妙散高剂量组改善最为明显，加味四妙散各剂量组和秋水仙碱组大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著下降（P<0.01），NLRP3、Caspase-1、ASC蛋白与mRNA表达增加（P<0.01），加味四妙散中、高剂量组和秋水仙碱组大鼠滑膜组织中miR-223-3p的表达显著升高（P<0.01）；与秋水仙碱组比较，加味四妙散低剂量组IL-1β、IL-6、TNF-α显著升高（P<0.01），加味四妙散中剂量组NLRP3、Caspase-1、ASC蛋白表达升高、miR-223-3p表达下降（P<0.05），低剂量组IL-1β、IL-6、TNF-α水平明显升高（P<0.01），NLRP3、Caspase-1、ASC蛋白表达与mRNA表达升高、miR-223-3p表达下降（P<0.01）。结论 加味四妙散方可能通过调控miR-223-3p干预NLRP3/IL-1β信号通路发挥抑制炎症的作用。