| Tet-on调控的基因表达载体的构建与体外表达研究 |
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| 作者姓名： | 杨丽华 周常文 |
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| 作者单位： | 1. 徐州医学院生物学教研室,江苏徐州,221002;福建医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学系,福建福州,350004
2. 福建医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学系,福建福州,350004 |
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| 基金项目： | 福建医科大学科研发展基金 |
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| 摘 要： | 目的 依据Tet-on系统的原理,构建2个真核表达载体pTRE-Cre-EGFP（P1）和Pcmv-rtTA-EGFP-Cre-Phcmv（P2）并转染293T细胞,通过观察报告基因EGFP表达的绿色荧光,检验载体中基因元件能否正常发挥作用.方法 从pCre-IRES-EGFP载体上切下Cre-EGFP,与pTRE载体连接成P1载体,切下P1的部分片段Phcmv-Cre-EGFP 与pTet-On载体的部分片段Pcmv-rtTA连接成 P2载体,利用脂质体将pTet-on和P1共转染、将P2单转染入293T细胞,加入或者不加强力霉素（Doxcycline,Dox）诱导,观察绿色荧光.结果 成功构建载体P1及P2;P1和pTet-on质粒的共转染及P2的单转染在Dox诱导下均有绿色荧光的表达,无Dox诱导时绿色荧光表达水平极低.结论 构建的载体P1及P2中的基因元件在体外均能正常发挥作用,为进一步制备诱导性表达Cre的转基因小鼠奠定了基础.
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| 关 键 词： | 真核表达载体 Tet-on 转染 |
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