siRNA干扰NF-кB家族成员表达抑制人肝癌HepG2细胞表达NKG2DLs

目的：探讨舒尼替尼诱导人肝癌HepG2细胞表达的自然杀伤细胞2族成员D配体（natural killer group 2 member D ligands，NKG2DLs）与核因子kappa B（nuclear factor B kappa, NF-κB）信号通路之间的相互作用。方法：常规体外培养HepG2细胞，利用实时荧光定量PCR检测1 μmol/L舒尼替尼处理HepG2细胞24 h前后NF-κB基因家族成员 mRNA的表达情况，利用计算机辅助设计并合成NF-κB1、NF-κB2和RelB siRNA引物，通过脂质体法将目的基因siRNA转染于HepG2细胞，荧光显微镜观察转染情况，实时荧光定量PCR检测干扰效率，Western blotting检测siRNA转染前后HeG2细胞内NF-κB1、NF-κB2和RelB蛋白表达，流式细胞术检测siRNA前后HepG2细胞NKG2DLs表达率。结果： 实时荧光定量PCR结果显示，舒尼替尼处理HepG2细胞后，NF-κB1、NF-κB2和RelB mRNA表达水平升高，主要以NF-κB2 mRNA和RelB mRNA升高为主。荧光显微镜观测siRNA转染后HepG2细胞红色荧光表达率约为60%，干扰效率达95%以上。siRNA转染后HepG2细胞内NF-κB1、NF-κB2和RelB蛋白表达水平明显下降，siRNA转染+药物组NKG2DLs表达率明显低于药物处理组（P<0.05）。结论： 首次揭示了舒尼替尼通过NF-κB旁路途径诱导肿瘤细胞表达NKG2DLs。