葎草花粉主要变应原Hum s1的表达、纯化与结构预测

目的 克隆、表达、纯化葎草花粉主要变应原Hum s1，预测、分析其蛋白结构及功能，为评估该重组变应原的诊断及治疗效果奠定基础。方法 采用PCR扩增目的基因Hum s1，并将Hum s1通过Kpn Ⅰ/Xho Ⅰ位点克隆到pET32a表达载体，转化到克隆菌株E.coliDH5α，用PCR验证重组载体，并将表达载体转化至表达菌株E.coliBL-21，IPTG诱导表达目标基因，利用快速蛋白液相色谱技术纯化融合蛋白，并对表达蛋白的结构与功能进行预测分析。结果 成功构建原核表达质粒pET32a-G2，并表达纯化葎草花粉主要变应原Hum s1，纯度达90%以上。分析其结构含有3个潜在的抗原表位，2个EF-手型结构域，成功构建其三维模型。ELESA试验证明重组蛋白能与葎草花粉过敏患者血清结合，具有免疫学活性。 结论 成功构建了葎草花粉变应原Hum s1的原核表达载体,表达并纯化了重组蛋白,并通过生物信息学方法获得了目的蛋白的抗原表位和三维结构模型，为进一步开展重组疫苗研究奠定了基础。

Expression, Purification and Structure Prediction of Hum s1, a Major Allergen of Humulus Scandens