| 可回复性胰岛细胞永生化载体phTERT-I-GTKlox的构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 吴惠玲,陈兵,粟永萍,王军平,艾国平,陈耀凯,杨仕明.可回复性胰岛细胞永生化载体phTERT-I-GTKlox的构建与鉴定[J].免疫学杂志,2008,24(2):226-229. |
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| 作者姓名： | 吴惠玲 陈兵 粟永萍 王军平 艾国平 陈耀凯 杨仕明 |
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| 作者单位： | [1]第三军医大学西南医院内分泌科,重庆400038 [2]第三军医大学预防医学院全军复合伤研究所,重庆400038 [3]第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038 [4]第三军医大学西南医院全军消化病研究所,重庆400038 |
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| 基金项目： | 第三军医大学校科研创新基金资助项目（2007XG25）.致谢：感谢第三军医大学预防医学院全军复合伤研究所为本实验提供的实验场所及条件;感谢西南医院全军感染病研究所陈耀凯教授、全军消化病研究所杨仕明教授提供的质粒. |
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| 摘 要： | 目的构建以人端粒酶逆转录酶（human telomerase reverse transcrimase，hTERT）为永生化基因、loxP为重组位点的可回复性永生化逆转录病毒载体。方法采用EcoR Ⅰ、Sal Ⅰ双酶切、回收含有EGFP-胸苷激酶融合基因及LoxP序列的逆转录病毒载体pBTGTKlox，将经PCR扩增的IRKS序列克隆入其中，构建成pI-GTKlox；将hTERT克隆入pI-GTKlox的Eco R Ⅰ酶切位点，构建成phTERT-Ⅰ-GTKlox。进行菌落PCR、酶切、测序鉴定。结果菌落PCR鉴定5个菌落中2个为阳性克隆。阳性克隆质粒经EcoR Ⅰ酶切鉴定形成预计的6．5kb及3．5kb两个片段，进一步经测序证实插入的hTERT序列无核苷酸突变。结论成功构建了phTERT-I-GTKlox可回复性永生化逆转录病毒载体，为建立可回复性永生化胰岛细胞奠定了基础。
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| 关 键 词： | 可回复性永生化 条件基因敲除 人端粒酶逆转录酶 |
| 文章编号： | 1000-8861（2008）02-0226-04 |
| 收稿时间： | 2007-10-23 |
| 修稿时间： | 2007-12-03 |
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