构建游离脂肪酸诱导胰岛细胞凋亡模型验证球形脂联素的拮抗作用

目的：构建游离脂肪酸(棕榈酸)诱导胰岛细胞凋亡模型，并观察球形脂联素对胰岛细胞凋亡的拮抗作用。方法：实验于2004—15／2005—30在中山大学附属第二医院林百欣医学研究中心完成。构建游离脂肪酸诱导胰岛细胞凋亡模型及分组：采用小鼠胰岛素瘤细胞株βNIT-1，取对数生长期的细胞，按1&;#215;10^5个／孔的密度接种于6孔板，细胞生长至80％融合时将随机细胞分为3组，每组3孔，分别为对照组，棕榈酸组，棕榈酸+球形脂联素组。3组培养基均含5g／L的牛血清白蛋白、体积分数为0．03胎牛血清及体积分数为0．01的无水乙醇；棕榈酸组又加含有终浓度为500μmol／L棕榈酸；棕榈酸+球形脂联素组又加终浓度为500μmol／L棕榈酸和0．5mg／L脂联素。处理48h后终止实验。采用Hochest33342和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法检测棕榈酸诱导胰岛细胞凋亡率和凋亡指数及脂联素处理后脂性凋亡的改善情况。结果：①经Hochest33342染色检测3组小鼠胰岛素瘤细胞株βNIT-1细胞凋亡指数明显不同(F=300．270，P&;lt;0．05)。棕榈酸组明显高于对照组(12．40&;#177;1．57)％，(2．05&;#177;0．59)％]，说明500μmol／L棕榈酸可成功构建胰岛细胞凋亡模型，经脂联素处理后凋亡指数明显降低(12．40&;#177;1．57)％，(3．87&;#177;0．93)％]，说明球形脂联素组对胰岛细胞凋亡有拮抗作用。②经脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法检测小鼠胰岛素瘤细胞株βNIT-1细胞凋亡指数3组明显不同(F=191．221，P&;lt;0．05)，棕榈酸组明显高于对照组(26．33&;#177;5．6)％．(2．32&;#177;0．78)％]，说明500μmol／L棕榈酸可成功构建胰岛细胞凋亡模型，经脂联素处理后凋亡指数明显降低(2．32&;#177;0．78)％，(4．90&;#177;0．82)％，P&;lt;0．05]说明球形脂联素组对胰岛细胞凋亡有拮抗作用。结论：①Hoescht染色法及脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法结果均表明在体积分数为0．03胎牛血清、5g／L的牛血清白蛋白的Dulbecco改良的Eagle培养液条件下加入终浓度为500μmol／L棕榈酸处理细胞48h可成功构建胰岛细胞凋亡的细胞模型。②球形脂联素可拮抗胰岛细胞的脂性凋亡，从而发挥了其调节糖脂代谢的作用。