| 原癌基因pim-3的克隆及其对肝癌细胞凋亡的影响 |
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| 引用本文： | 邓欢,刘亮明,张吉翔,罗杰,尹东,熊瑛,汤蕾,谢正元.原癌基因pim-3的克隆及其对肝癌细胞凋亡的影响[J].世界华人消化杂志,2006,14(23):2288-2293. |
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| 作者姓名： | 邓欢 刘亮明 张吉翔 罗杰 尹东 熊瑛 汤蕾 谢正元 |
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| 作者单位： | 1. 南昌大学第二附属医院消化内科,江西省分子医学重点实验室,江西省南昌市,330006
2. 江西省分子医学重点实验室江西省南昌市,330006 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;江西省科技厅科研项目 |
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| 摘 要： | 目的:克隆大鼠原癌基因pim-3并构建真核表达重组质粒pEGFP-N2／pim-3,观察他在真核细胞SMMC-7721中的表达情况以及对细胞凋亡的影响．方法:利用TRIzol从液氮保存的大鼠骨骼肌组织中提取总RNA,采用RT-PCR方法获取pim-3 cDNA,并构建重组质粒pEGFP-N2／pim-3,转化用CaCl2法制备的大肠杆菌JM-109菌株,酶切以及测序鉴定．将重组质粒通过脂质体介导转染肝癌SMMC-7721细胞后利用倒置荧光显微镜观察基因表达情况,并利用流式细胞术及MTT比色实验对转染细胞的生物学行为进行检测．结果:将RT-PCR产物全部用于低熔点琼脂糖凝胶电泳、回收,在DL 2000 Marker 1000 bp附近可见清晰条带,与实验设计符合;阳性克隆质粒的酶切电泳和测序结果表明,大鼠pim-3 cDNA的克隆和重组质粒pEGFP-N2／pim-3的构建成功;重组质粒pEGFP-N2/pim-3转染组凋亡细胞占3．5％,质粒pEGFP-N2转染组凋亡细胞占10．7％,而仅加入转染液的空白组凋亡细胞占11．0％,重组质粒转染组与两对照组之间差异有统计学意义(P<0．05);倒置荧光显微镜可以观察到pim-3在SMMC-772 1细胞中的正常表达;MTT比色实验显示原癌基因pim-3能够明显抑制细胞凋亡．结论:真核表达重组质粒pEGFP-N2/pim-3构建成功;原癌基因pim-3能明显抑制肝癌细胞凋亡．
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| 关 键 词： | 肝癌 原癌基因pim-3 克隆 凋亡 荧光显微镜 MTT比色试验 流式细胞术 |
| 收稿时间： | 2006-05-30 |
| 修稿时间： | 2006年5月30日 |
Cloning of pro-oncogene pim-3 cDNA and its effect on apoptosis of hepatocellular carcinoma cells |
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| Huan Deng,Liang-Ming Liu,Ji-Xiang Zhang,Jie Luo,Dong Yin,Ying Xiong,Lei Tang,Zheng-Yuan Xie.Cloning of pro-oncogene pim-3 cDNA and its effect on apoptosis of hepatocellular carcinoma cells[J].World Chinese Journal of Digestology,2006,14(23):2288-2293. |
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| Authors: | Huan Deng Liang-Ming Liu Ji-Xiang Zhang Jie Luo Dong Yin Ying Xiong Lei Tang Zheng-Yuan Xie |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Liver cancer Pro-oncogene pim-3 Clone Apoptosis Fluorescent microscopy Flow cytometry MTT colorimetric assay |
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