| 鼠抗脂多糖单链噬菌体抗体库的构建 |
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| 引用本文： | 陈鸣,府伟灵,俞丽丽,张雪.鼠抗脂多糖单链噬菌体抗体库的构建[J].第三军医大学学报,2001,23(4):407-409. |
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| 作者姓名： | 陈鸣 府伟灵 俞丽丽 张雪 |
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| 作者单位： | 第三军医大学附属西南医院检验科, |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目! ( 39570 0 4 2 ) |
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| 摘 要： | 目的 构建一个鼠源性的抗脂多糖 (Lipopolysaccharide ,LPS)单链噬菌体抗体库 ,以供进一步生物医学应用。方法 用纯LPS免疫BALB/c小鼠 4个星期后 ,从脾细胞中提取总RNA ,用RT PCR技术扩增出小鼠抗体重链、轻链可变区基因 (VH ,VL) ,然后用Linker将VH ,VL交联形成单链抗体可变区片段 (ScFv)。经NotI、SfiI双酶切后与经同样双酶切的pCANTAB5E噬菌粒载体相连 ,转化入感受态大肠杆菌TG1,构建鼠抗LPS单链噬菌体抗体库 ,并随机抽取转化后的 4个大肠杆菌TG1菌落 ,以检测外源DNA的转入情况。结果 ELISA法检测小鼠血清中抗LPS的效价为 1∶12 80 0。提取的总RNA浓度为 12 .3 813 μg/ml ,纯度较好。扩增出的VH长约 3 4 0bp ,VL长约 3 2 0bp ,ScFv长约 80 0bp。转化入TG1后有约 1.9× 10 7个菌落 ,抽提 4个菌落后经SfiⅠ、NotⅠ双酶切的结果显示有 1个菌落的质粒转化进了外源DNA片段。结论 成功地构建出了一个有效库容量为 4.75× 10 6的鼠抗LPS单链噬菌体抗体库。
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| 关 键 词： | 脂多糖 单链噬体抗体库 LPS 鼠 |
| 文章编号： | 1000-5404(2001)04-0407-03 |
| 修稿时间： | 2000年4月5日 |
Construction of anti-lipopolysaccharide single-chain phage antibody library in mice |
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| CHEN Ming,FU Wei-ling,YU Li-li,Zhang Xue.Construction of anti-lipopolysaccharide single-chain phage antibody library in mice[J].Acta Academiae Medicinae Militaris Tertiae,2001,23(4):407-409. |
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| Authors: | CHEN Ming FU Wei-ling YU Li-li Zhang Xue |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | LPS phage antibody library |
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