反义hTERT体外抑制白血病细胞增殖的研究 |
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引用本文: | 孙来保,李成荣,文剑明,王国兵,张萌,杨军,李若馨.反义hTERT体外抑制白血病细胞增殖的研究[J].南方医科大学学报,2004,24(5):521-524. |
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作者姓名: | 孙来保 李成荣 文剑明 王国兵 张萌 杨军 李若馨 |
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作者单位: | 深圳市儿童医院,广东,深圳,518026;中山大学中山医学院病理学教研室,广东,广州,510089 |
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基金项目: | 深圳市卫生科技计划基金资助项目(199805021)~~ |
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摘 要: | 目的研究反义hTERT基因对白血病细胞体外增殖的抑制作用。方法体外通过SuperFect将已构建好的正、反义hTERT真核表达载体转染HL60白血病细胞,再经过G418及PCR筛选鉴定分别转入了正、反义hTERT载体的抗性克隆细胞HL60-s和HL60-as。随后运用实时荧光定量RT-PCR技术及TRAP-银染法对各组细胞内源性hTERT mRNA的表达情况及端粒酶的活性进行检测。同时还采用MTT法、双层软琼脂克隆形成试验、流式细胞术观察和分析反义hTERT对白血病细胞体外生长增殖活力的影响及是否能诱导瘤细胞的凋亡。结果与空白对照、正义hTERT组相比,反义hTERT能显著地降低HL60细胞内源性hTERT mRNA的表达(P<0.01)和下调端粒酶活性。当各组细胞传至第25代后,与HL60、HL60-s比较,HL60-as细胞的生长速度和集落形成能力明显地减慢和降低,同时伴有凋亡率的显著增加。结论反义hTERT在体外能抑制白血病细胞的生长增殖能力,其潜在、广谱的抗肿瘤作用的分子生物学机制可能是首先通过抑制和下调hTERT表达(端粒酶活性)而最终引发瘤细胞衰亡的途径来实现的。
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关 键 词: | 反义hTERT 白血病 实时荧光定量RT-PCR 细胞增殖 分子生物学治疗 |
文章编号: | 1000-2588(2004)05-0521-04 |
修稿时间: | 2003年12月28 |
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