SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR测定肠道病毒71型(EV71)RNA拷贝数方法的建立 |
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作者姓名: | 朵建英 王卫 丛喆 刘强 魏强 |
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作者单位: | 中国医学科学院实验动物研究所,北京协和医学院比较医学中心,卫生部人类疾病比较医学重点实验室,北京,100021 |
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基金项目: | 科技重大专项-艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治;项目号2009ZX10004-402 |
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摘 要: | 目的建立SYBR GreenⅠ荧光染料实时定量RT-PCR方法,测定实验动物等来源的EV71病毒RNA。方法运用EV71VP1保守区引物,优化real time RT-PCR条件,运用NASBA方法扩增EV71病毒RNA,计算拷贝数,经10倍系列稀释做出标准曲线,作为EV71病毒RNA定量检测的外标准品。结果应用Qiagen公司QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kit,该标准品可精确定量到100copies/μL,PCR扩增效率达到99.5%。结论 SYBRGreenⅠ荧光染料实时定量PCR法测定EV71病毒RNA拷贝数的方法敏感性高、稳定性好,可用于EV71病毒RNA载量的定量测定。
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关 键 词: | 肠道病毒71型(EV71) 模型,动物 病毒载量 实时定量RT-PCR |
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