基于斑马鱼毒/效同步评价的壮骨关节丸促骨骼发育作用与初步安全性研究

目的 用斑马鱼毒/效同步法评价壮骨关节丸的促骨骼发育作用及初步安全性。方法 将受精后3 d（3 day post fertilization，3 dpf）的斑马鱼幼鱼暴露于25 μmol·L^-1泼尼松龙（prednisolone，PN），壮骨关节丸溶液及含PN的壮骨关节丸溶液（12.5，25，50，100，200，300和400 μg·mL^-1）中，0.5% DMSO胚胎培养基为空白对照，于28℃培养至8 dpf，隔天换一半药液。采用茜素红对8 dpf的斑马鱼幼鱼头部骨骼染色，定量分析骨骼染色区域；给药期间每天同步观察鱼死亡及脏器中毒情况。结果 在8 dpf时，100 μg·mL^-1及以上浓度的壮骨关节丸健康鱼组和含PN的壮骨关节丸模型鱼组斑马鱼死亡率>80%，未进行骨骼染色。壮骨关节丸健康鱼组（12.5，25，50 μg·mL^-1）的斑马鱼头骨矿化面积和累积光密度值IOD与PN组比较显著增加（P<0.01或<0.05），而含PN的壮骨关节丸模型鱼组（12.5，25，50 μg·mL^-1）斑马鱼的头骨矿化面积或IOD结果显示阻止PN致骨丢失的趋势，但均低于健康鱼组。给予壮骨关节丸后，PN模型鱼的死亡速度和死亡率较健康鱼高，鱼死亡率与给药浓度和时间呈依赖性；PN模型鱼的6 dpf和8 dpf半数致死浓度值（63.92，63.92 μg·mL^-1）均低于健康鱼（94.66，87.84 μg·mL^-1）。结论 斑马鱼毒/效同步法快速评价了壮骨关节丸对健康鱼和模型鱼的骨骼发育作用及初步安全性。壮骨关节丸对健康鱼和模型鱼的作用及毒性有差别。

Research on Bone Development Promotion and Preliminary Safety of Zhuanggu Guanjie Pill based on Synchronous Evaluation of Toxicity and Efficacy Using Zebrafish