应用以人转录组为靶点的shRNA文库筛选肺癌肿瘤相关抑制基因 |
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引用本文: | 徐晖,李希,周春水.应用以人转录组为靶点的shRNA文库筛选肺癌肿瘤相关抑制基因[J].实用肿瘤学杂志,2019,33(2):97-102. |
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作者姓名: | 徐晖 李希 周春水 |
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作者单位: | 1.哈尔滨医科大学附属肿瘤医院检验科(哈尔滨 150081);2.大连医科大学附属第一医院检验科;3.哈尔滨医科大学遗传学教研室 |
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基金项目: | 国家自然科学基金(青年基金)(编号:31600662);中国博士后科学基金(编号:2018M641697);黑龙江省卫生计生委(编号:2018-514) |
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摘 要: | 目的 应用shRNA文库筛选肺上皮细胞相关肿瘤抑制基因,并验证其抑制细胞恶性转化的功能,为肿瘤防治提供新的靶点。方法 用GP2-293病毒包装细胞系建立shRNA逆转录病毒文库,感染永生化肺上皮细胞BEAS-2B,经软琼脂克隆形成实验筛选转染的上皮细胞克隆,选择转化细胞克隆经PCR扩增出所插入的shRNA片段,经Sanger法测序和比对确定相应shRNA的靶点基因。通过软琼脂克隆及裸鼠成瘤实验验证候选肿瘤抑制基因INPP4B的肿瘤抑制功能。MTT实验检测细胞的增殖情况。结果 通过软琼脂克隆形成筛选出6个候选基因,选取INPP4B进行功能验证。在BEAS-2B细胞中沉默INPP4B基因可促进细胞的克隆形成,细胞增殖速度加快,沉默细胞系在裸鼠皮下成瘤能力增强,说明INPP4B参与肿瘤形成。结论 shRNA文库及软琼脂克隆形成实验是筛选肿瘤抑制基因的一个有力工具,INPP4B是肺上皮细胞恶性转化抑制因子。
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关 键 词: | shRNA文库 软琼脂克隆形成 肿瘤抑制因子 INPP4B |
收稿时间: | 2018-08-30 |
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