| 细菌核酸提取方法对荧光定量PCR检测差异分析 |
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| 引用本文： | 闻子钰,梁昊,顾一心,鞠长燕,马艳萍,段永翔,张茂俊.细菌核酸提取方法对荧光定量PCR检测差异分析[J].中国病原生物学杂志,2019(6):621-624. |
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| 作者姓名： | 闻子钰 梁昊 顾一心 鞠长燕 马艳萍 段永翔 张茂俊 |
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| 作者单位： | 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所;深圳市南山区疾病预防控制中心;中山大学公共卫生学院 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划项目(No.2018YFC1603800);深圳三名工程项目(No.SZSM201803081) |
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| 摘 要： | 目的观察和分析常见食源性病原菌及粪便中病原菌DNA提取方法对荧光定量PCR检测结果的影响。方法以弯曲菌、副溶血弧菌和沙门菌为模型菌株,分别采用水煮法、细胞裂解法、试剂盒法(过滤法和磁珠法)提取病原菌DNA并进行荧光定量PCR检测并对试验结果作差异比较分析;应用细胞裂解法和过滤法分别提取24份随机抽样的粪便标本DNA,针对细菌16SrDNA特异序列进行荧光定量PCR检测,比较2种DNA提取方法对于病原菌检测结果的差异性。结果在不同菌种、不同浓度的条件下,细胞裂解法提取细菌纯培养物DNA的Ct值均低于其他三种方法(P<0.05),水煮法、过滤法、磁珠法的Ct值之间的比较结果呈现多样性。细胞裂解法提取粪便标本的病原DNA为模板进行细菌16S rDNA特异序列的荧光定量PCR检测结果阳性18份,阴性6份,试剂盒过滤法提取24份粪便标本检测结果皆为阳性。结论在对纯培养的3种食源性病原菌进行荧光定量PCR鉴定时,为节省时间和成本可应用细胞裂解法或水煮法提取模板DNA,与2种商业试剂盒(过滤法和磁珠法)相比效果较好;对粪便标本病原菌进行荧光定量PCR检测时,试剂盒提取粪便标本病原DNA的扩增效果优于细胞裂解法。
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| 关 键 词： | 细菌核酸提取 水煮法 细胞裂解法 试剂盒法 荧光定量PCR |
Comparison of methods of DNA extraction for real time PCR analysis |
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| WEN Zi-yu,LIANG Hao,GU Yi-xin,JU Chang-yan,MA Yan-ping,DUAN Yong-xiang,ZHANG Mao-jun.Comparison of methods of DNA extraction for real time PCR analysis[J].Journal of Pathogen Biology,2019(6):621-624. |
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| Authors: | WEN Zi-yu LIANG Hao GU Yi-xin JU Chang-yan MA Yan-ping DUAN Yong-xiang ZHANG Mao-jun |
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| Institution: | (National Institute for Communicable Disease Control and Prevention, Chinese Center for Disease Control and Prevention;Shenzhen Nanshan Center for Disease Control and Prevention,Shenzhen,China 518051;School of Public Health, Sun Yat-Sen University,Guangzhou 510030) |
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| Abstract: | WEN Zi-yu;LIANG Hao;GU Yi-xin;JU Chang-yan;MA Yan-ping;DUAN Yong-xiang;ZHANG Mao-jun(National Institute for Communicable Disease Control and Prevention, Chinese Center for Disease Control and Prevention;Shenzhen Nanshan Center for Disease Control and Prevention,Shenzhen,China 518051;School of Public Health, Sun Yat-Sen University,Guangzhou 510030) |
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| Keywords: | DNA extraction direct boiling cell lysis commercial kit real-time PCR |
| 本文献已被 CNKI 维普 等数据库收录！ |
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