| T载体的构建及日本血吸虫肌动蛋白基因PCR产物的快速克隆 |
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| 引用本文： | 沈玉娟,曹建平,刘述先,徐馀信,宋光承.T载体的构建及日本血吸虫肌动蛋白基因PCR产物的快速克隆[J].中国血吸虫病防治杂志,2004,16(4):277-280. |
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| 作者姓名： | 沈玉娟 曹建平 刘述先 徐馀信 宋光承 |
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| 作者单位： | 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所,世界卫生组织疟疾、血吸虫病和丝虫病合作中心,卫生部寄生虫病原和媒介生物学重点实验室,上海,200025 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划)，国家自然科学基金，上海市科委资助项目 |
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| 摘 要： | 目的构建快速高效克隆PCR产物的克隆载体(T载体),并对日本血吸虫肌动蛋白全长编码基因PCR产物进行快速克隆.方法日本血吸虫肌蛋白全长编码基因的扩增采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法.质粒pGEM5Zf ( )经限制性内切酶EcoR V 酶切,在仅含有脱氧胸苷三磷酸(dTTP)的PCR缓冲液中于70 ℃作用2 h,在每个片段的3'端加上一个脱氧胸苷(dT)碱基,构建成T载体.根据PCR扩增产物3'端存在一个非模板依赖的脱氧腺苷(dA)原理,将扩增产物直接克隆入T载体并测序.结果阳性克隆经琼脂糖凝胶电泳、限制性酶切分析、PCR及DNA序列测定等均证实克隆获得成功,且效率很高.与曼氏血吸虫肌动蛋白比较,核苷酸和推断的氨基酸的同源性分别是92.5%和99.7%.结论构建的pGEM5Zf-T载体对日本血吸虫肌动蛋白编码基因的PCR产物直接克隆既经济、简便,又快速、高效,所构建的T载体由于在插入位点两侧具有pUC/M13测序引物序列,可直接测定重组质粒中插入片段的核苷酸序列.所获得的日本血吸虫(大陆株)肌动蛋白编码基因与曼氏血吸虫有极高的同源性.
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| 关 键 词： | 日本血吸虫 肌动蛋白 T载体 测序 |
| 文章编号： | 1005-6661(2004)04-0277-04 |
| 修稿时间： | 2004年7月10日 |
CONSTRUCTION OF T VECTOR AND RAPID CLONG OF PCR PRODUCTS OF GENE ENCODING SHISTOSOMA JAPONICUM ACTIN |
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| Shen Yujuan,Cao Jianping,Liu Shuxian,Xu Yuxin,Song Guangcheng.CONSTRUCTION OF T VECTOR AND RAPID CLONG OF PCR PRODUCTS OF GENE ENCODING SHISTOSOMA JAPONICUM ACTIN[J].Chinese Journal of Schistosomiasis Control,2004,16(4):277-280. |
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| Authors: | Shen Yujuan Cao Jianping Liu Shuxian Xu Yuxin Song Guangcheng |
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| Keywords: | PCR |
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