大鼠脾细胞核体外转录模型

作者采用Kohji Ueno法加以改良,结合使用了低渗和低浓度的去垢剂,纯化了脾细胞核,加入四种核苷三磷酸、~3H-UTP和某些金属离子,进行脾细胞核体外转录作用的研究。 观察了底物浓度、温度、pH等与转录活性的关系;探讨了Mg~( )、Mn~( )、NH_4~ 等离子和放线菌素D、α-Amanitin对转录活性的影响。结果显示Mn~( )和高浓度的(NH_4)_2SO_4(200mM)对转录活性有显著促进作用,而放线菌素D和α-Amanitin有抑制作用。低浓度(1μg/ml)的α-Amanitin可抑制转录活性80％以上。选择了适当的离子浓度能显示较高的RNA聚合酶的活性。此转录活性与一定范围的细胞核浓度呈直线关系。底物需要四种核瞢酸的存在,说明该模型反映的是DNA依赖的RNA聚合酶的活性,适用于转录调控的研究。