| 重组人白细胞介素10在毕赤酵母中的表达及生物学活性测定 |
| |
| 引用本文： | 井申荣,邹全明,曾韦锟,毛旭虎,刘开云. 重组人白细胞介素10在毕赤酵母中的表达及生物学活性测定[J]. 中华微生物学和免疫学杂志, 2005, 25(9): 773-776 |
| |
| 作者姓名： | 井申荣 邹全明 曾韦锟 毛旭虎 刘开云 |
| |
| 作者单位： | 1. 650224,昆明理工大学生物工程技术研究中心
2. 400038,重庆,第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室 |
| |
| 摘 要： | 目的在毕赤酵母中分泌表达具有生物学活性的重组人白细胞介素10(rhIL-10),用于IL-10的生理功能研究和动物试验。方法通过PCR扩增IL-10基因,插入到重组质粒α/pUC18的α因子信号序列的XhoⅠ和EcoRⅠ酶切位点处,再将融合基因αIL-10重组到表达质粒pPIC9K的BamHⅠ和EcoRⅠ之间,SalⅠ酶切线性化重组质粒IL-10/pPIC9K,电穿孔转化毕赤酵母,营养缺陷型培养基MD和G418筛选含高拷贝表达盒的酵母转化子,PCR鉴定是否含有目的基因IL-10,甲醇诱导rhIL-10的表达,SDS-PAGE和Westernblot鉴定目的蛋白,用ELISA定量测定及MC/9细胞分析IL-10生物学活性。结果成功构建了重组表达质粒IL-10/pPIC9K,获得了4个含IL-10基因的高拷贝毕赤酵母转化子,甲醇诱导后,在摇瓶水平的IL-10表达量为(0.627±0.09)mg/L,比活性为1.5×105U/mg。结论毕赤酵母分泌表达的IL-10具有良好的生物学活性。
|
| 关 键 词： | 白细胞介素10 毕赤酵母 分泌表达 生物学活性 重组人白细胞介素10 生物学活性测定 毕赤酵母 IL-10基因 质粒pPIC9K SDS-PAGE rhIL-10 Western EcoRⅠ |
| 收稿时间： | 2004-12-20 |
| 修稿时间： | 2004-12-20 |
Expression of recombinant interleukin 10 in Pichia pastoris and identification of its bioactivity |
| |
| JING Shen-rong,ZOU Quan-ming,ZENG Wei-kun,MAO Xu-hu,LIU Kai-yun. Expression of recombinant interleukin 10 in Pichia pastoris and identification of its bioactivity[J]. Chinese Journal of Microbiology and Immunology, 2005, 25(9): 773-776 |
| |
| Authors: | JING Shen-rong ZOU Quan-ming ZENG Wei-kun MAO Xu-hu LIU Kai-yun |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Interleukin 10 Pichia pastoris Secretory expression Bioactivity |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
|
