同时检测4种肠道原虫的多重PCR方法的建立及应用

目的建立一种同时检测隐孢子虫、贾第鞭毛虫、微孢子虫和环孢子虫4种原虫的多重PCR体系。方法基于隐孢子虫18S rRNA基因、贾第鞭毛虫TPI基因、微孢子虫SSU rRNA基因、环孢子虫18S rRNA基因保守序列设计特异引物,建立和优化一种同时检测隐孢子虫、贾第鞭毛虫、微孢子虫和环孢子虫的多重PCR方法,测序验证阳性结果,并进行该方法的敏感性和特异性试验。结果成功建立一种同时检测隐孢子虫、贾第鞭毛虫、微孢子虫和环孢子虫的多重PCR方法,在同一个PCR反应体系中稳定扩增获得大小分别为314、113、179和242 bp的产物,检出限为≥10拷贝的原虫DNA克隆质粒。该方法与单病原PCR检测的结果一致性较好。结论本研究建立的4种原虫的多重PCR检测技术操作简单、快速、成本效益高,可用于人体、动物和环境中隐孢子虫、贾第鞭毛虫、微孢子虫和环孢子虫感染和污染的筛查。