A Comparison of Surface and Cytoplasmic Antigens of Aspergillus fumigatus in an Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA)

Summary: Cytoplasmic antigens of Aspergillus fumigatus were prepared by exposing the mycelium to a lytic enzyme system from Trichodenna hanianum to yield protoplasts. Following physical rupture, the watersoluble constituents gave multiple peaks with homologous antiserum on 2-dimensional immunoelectrophoresis. The same system was used to identify reactive terminal sugar residues on antigen molecules by the incorporation of lectins of appropriate specificities in an intermediate gel. On affinity chromatography on Conmnavalin A (ConA) - linked Sepharose, the bulk of the applied cytoplasmic material eluted in the void volume. The elution profile obtained on column chromatography of the extract on wheat germ agglutinin (WGA)-linked Sepharose showed two major components, one of which was elutable only with N-acetyl-D-glucosamine. Cytoplasmic antigens and antigens derived from the mycelial wall by detergent extraction showed comparable reactivity towards homologous antisera when tested in an en-zymelinked immunosorbent assay (ELISA). In the same system, the wallassociated antigens proved far superior in the detection of specific IgG in sera from patients with aspergillus-related diseases. Zusammenfassung: Die zytoplasmatischen Antigene von Aspergillus fumigatus wurden gewonnen, in dem das Myzel einem lytischen Enzymsystem von Trichoderma harzianum ausgesetzt wurde, um so Protoplasten zu gewinnen. Nach Aufbrechen der Protoplasten ergaben die wasser-1öslichen Bestandteile zahlreiche Peaks mit homologem Antiserum bei der 2-dimensionalen Immunelektrophorese. Das gleiche System wurde benutzt, um reaktive terminale Zuckerreste an Antigenmolekülen zu identifizieren, indem Lectine mit entsprechender Spezifität in ein intermediäres Gel eingebracht wnrden. Bei der Affinitätschromatographie über Conavalin A (ConA) beschickter Sepharose, wurde der Hauptteil des aufgetragenen zytoplasmatischen Materials ausgewaschen. Dagegen ergab das Elutionsprofil mit Säulenchromatographie bei der die Sepharose mit Weizenkeimagglutinim (WGA) beschickt war, zwei Hauptkomponenten von denen eine nur mit N-acetyl-D-glucosamin eluiert werden konnte. Zytoplasmatische Antigene und Antigene von der Zellwand der Hyphen, die durch Extraktion mit Detergentien gewonnen worden waren, zeigten eine vergleichbare Reaktivität gegenüber homologen Antisera, wenn sie mit einem Enzymimmunosorbenttest (ELISA) untersucht wurden. Mit dem gleichen System zeigte sich, daß die Zellwandantigene für die Entdeckung von spezifischem IgG von Patienten mit Krankheiten, bei denen Aspergillen eine Role spielen, welt überlegen waren.