| 肠出血性大肠杆菌O157∶H7毒力蛋白NleB1的表达、纯化及多克隆抗体的制备与鉴定 |
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| 引用本文： | 陈欣欣,廖翔,宋婷,周围,戴红梅,岳俊杰,王羽,王玉瑞,梁龙.肠出血性大肠杆菌O157∶H7毒力蛋白NleB1的表达、纯化及多克隆抗体的制备与鉴定[J].军事医学科学院院刊,2014(10). |
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| 作者姓名： | 陈欣欣 廖翔 宋婷 周围 戴红梅 岳俊杰 王羽 王玉瑞 梁龙 |
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| 作者单位： | 1. 军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071; 安徽大学，合肥 230601
2. 军事医学科学院生物工程研究所,北京,100071 |
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| 摘 要： | 目的：构建肠出血性大肠杆菌（ EHEC） O157∶H7毒力蛋白nleB1基因的原核表达载体，诱导表达重组蛋白，制备NleB1的抗血清。方法从EHEC O157∶H7 EDL933株的全基因组中PCR扩增出编码nleB1的990个碱基序列，构建原核表达载体pET24a-nleB1，将构建的重组表达载体的质粒pET24a-nleB1转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中，利用异丙硫半乳糖苷（IPTG）诱导融合蛋白His-NleB1表达，并利用镍柱进行亲和层析纯化和切胶纯化，以纯化后的融合蛋白His-NleB1为抗原免疫BALB/c小鼠，获得抗血清。 Western印迹和ELISA法鉴定获得的抗血清。结果成功构建了pET24a-nleB1原核表达载体，纯化得到融合蛋白His-NleB1，进而免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体，Western印迹和ELISA法证实多克隆抗体制备成功。结论成功获得了EHEC O157∶H7的毒力蛋白NleB1的多克隆抗体，为研究EHEC O157∶H7毒力蛋白NleB1的功能奠定了基础。
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| 关 键 词： | 肠出血性大肠杆菌 NleB1 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体 |
Prokaryotic expression,purification, identification,and polyclonal antibody prepa-ration of enterohemorrhagic Escherichia coli effector NleB1 |
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| CHEN Xin-xin,LIAO Xiang,SONG Ting,ZHOU Wei,DAI Hong-mei,YUE Jun-jie,WANG Yu,WANG Yu-rui,LIANG Long.Prokaryotic expression,purification, identification,and polyclonal antibody prepa-ration of enterohemorrhagic Escherichia coli effector NleB1[J].Bulletin of the Academy of Military Medical Sciences,2014(10). |
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| Authors: | CHEN Xin-xin LIAO Xiang SONG Ting ZHOU Wei DAI Hong-mei YUE Jun-jie WANG Yu WANG Yu-rui LIANG Long |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | enterohemorrhagic Escherichia coli NleB1 prokaryotic expression protein purification polyclonal antibody |
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