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基于GS筛选系统的动物细胞高效表达载体的构建及应用
引用本文:高招刚,邵勇,高丽华,潘芸,刘羽,李伊培,胡显文,陈惠鹏. 基于GS筛选系统的动物细胞高效表达载体的构建及应用[J]. 军事医学科学院院刊, 2014, 0(10)
作者姓名:高招刚  邵勇  高丽华  潘芸  刘羽  李伊培  胡显文  陈惠鹏
作者单位:1. 安徽大学生命科学学院,合肥,230601
2. 军事医学科学院生物工程研究所,北京,100071
3. 沈阳药科大学生命科学学院,沈阳,110016
基金项目:“重大新药创制”国家科技重大专项资助项目
摘    要:目的:通过插入GS筛选系统和替换启动子改造载体以获得高效表达细胞系。方法将pIRES2-EGFP多克隆位点上的BamHⅠ位点突变,构建一个新的载体pIRES2-EGFP-B,通过AseⅠ和NheⅠ双酶切其上的巨细胞病毒(CMV)启动子,加入谷氨酰胺合成酶( GS)基因筛选标志,再通过PacⅠ和NheⅠ双酶切,插入人巨细胞病毒(hCMV)启动子,构建载体pHGS1.0。将目的基因分别插入载体pHGS1.0和pIRES2-EGFP中,通过比较重组蛋白TEM8(1-227)-VEGFR1domain2-IgG2(TV-IgG2)表达来分析新构建载体的优越性。结果成功插入GS筛选标志,并加入hCMV启动子,人免疫球蛋白定量试剂盒分析发现,重组蛋白表达量提高了5倍。结论通过GS系统筛选,得到高效表达目的蛋白载体系统,为后续的高效表达细胞系筛选奠定了基础。

关 键 词:谷氨酰胺合成酶  甲氨喋呤  蛋氨酸亚氨基代砜  巨细胞病毒  高效表达细胞系  重组蛋白质类

Animal cell screening system based on GS efficient expression vector and its application
GAO Zhao-gang,SHAO Yong,GAO Li-hua,PAN Yun,LIU Yu,LI Yi-pei,HU Xian-wen,CHEN Hui-peng. Animal cell screening system based on GS efficient expression vector and its application[J]. Bulletin of the Academy of Military Medical Sciences, 2014, 0(10)
Authors:GAO Zhao-gang  SHAO Yong  GAO Li-hua  PAN Yun  LIU Yu  LI Yi-pei  HU Xian-wen  CHEN Hui-peng
Abstract:
Keywords:glutamine synthetase  methotrexate  methionine sulphoximine  cytomegalovirus  efficient expressing cell lines  recombinant proteins
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