人类白细胞抗原新等位基因A*2636的确认

背景：目前中华骨髓库主要采用分辨率较高的聚合酶链反应-寡核苷酸探针分型反向杂交荧光微珠法检测人类白细胞抗原HLA-A、B、DRB1，该方法在提高分辨率的同时,有些检测结果难以一次性确定,可采用DNA测序技术确认。目的：识别和确认一个人类白细胞抗原新等位基因。设计、时间及地点：以DNA为观察对象的开放性实验。常规初检聚合酶链反应-寡核苷酸探针分型反向杂交荧光微珠法于2007-11在河南省红十字血液中心中华骨髓库河南分库人类白细胞抗原组织配型实验室完成，测序实验于2008-02在戴诺生物技术(北京)有限公司人类白细胞抗原实验室完成。材料：中国造血干细胞捐献者初检结果可疑为新基因的重采血样5 mL。方法：采用聚合酶链反应-寡核苷酸探针分型反向杂交荧光微珠法进行常规人类白细胞抗原分型，发现A位点反应格局异常，提示有2个无法解释的假阳性探针反应(10FP、88FP)和1个假阴性探针反应(58FN)、不能正常判读给出确切结果时，采用DNA测序技术测定 人类白细胞抗原A位点外显子2，3，4(Exon2，3，4)的核苷酸序列，并与已知相近等位基因进行序列对比分析。 主要观察指标：测序结果与已知人类白细胞抗原等位基因序列的比较分析。结果：聚合酶链反应-寡核苷酸探针分型反向杂交荧光微珠法基因分析结果显示，受检者人类白细胞抗原基因分型为A*02xx, 26xx(10 FP、88FP 58FN)，B *15(75), 55xx ，DRB1 08xx, 11xx, A位点反应格局异常，提示有2个无法解释假阳性反应(10 FP、88FP)，有1个假阴性探针反应(58FN)，不能指定为任何人类白细胞抗原A位点等位基因。对本例人类白细胞抗原A基因第2，3，4外显子双向之直接测序结果分析显示：A *02010101, A *260101 292 S/C。分析测序结果峰图，292位置应为C，分析软件提示该基因改变在A *26new一侧。该序列与人类白细胞抗原A *260101进行比对，同源性99%，在第2外显子区域292位碱基发生了G→C，74位的密码子GAC>CAC最终导致了氨基酸的改变，即天冬氨酸(Asp)→组氨酸(His)。结论：该序列为A位点的一个新等位基因，已在GenBank注册(注册号EU785343)，并于2008-04被WHO-HLA因子命名委员会正式命名为A *2636.(HWS10005530)。

Confirmation of human leukocyte antigen novel allele A*2636