龙葵碱对HepG2细胞NAT1酶活性及动力学影响的研究

 目的 探讨龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡的芳香胺N-乙酰化转移酶（NAT1的影响。方法 采用高效液相色谱法(HPLC，以对氨基苯甲酸(PABA为底物，以PABA被NAT1乙酰化为乙酰对氨基苯甲酸(Ac-PABA的量反应NAT1酶的活性。观察不同浓度、不同时间龙葵碱对完整HepG2细胞NAT1酶活性的影响；龙葵碱对HepG2细胞细胞质中NAT1酶活性的影响；通过改变底物PABA浓度，采用双倒数作图法，以底物PABA浓度的倒数(1/S对NAT1反应速率的倒数(1/V作直线，得出回归方程，计算K_m和V_max。结果 在NAT1酶活性测定中，龙葵碱能显著降低HepG2完整细胞NAT1的活性；龙葵碱能够降低HepG2细胞质内NAT1的活性；随着作用时间的增加Ac-PABA生成的量逐渐增加，但在相同作用时间段龙葵碱能显著降低Ac-PABA生成的量。动力学研究表明，以PABA为底物，对于HepG2完整细胞，阴性对照组的K_m和V_max分别为(1.04×10-3±8.36×10-5mmol·L -1、(1.64×10-4±9.57×10-6 nmol·106 cells-1，龙葵碱组的K_m和V_max分别为(1.06×10-3±6.97×10-5 mmol·L-1和(1.48×10-4±4.28×10-6 nmol·106 cells-1·h-1。对于HepG2细胞质，阴性对照组的K_m和V_max分别为(3.32×10-1±2.35×10-4mmol·L -1、(2.60×10-3±6.79×10-6 nmol·h-1·mg pro-1，龙葵碱组的K_m和V_max分别为(3.35×10-1±1.66×10-4 mmol·L-1和(2.22×10-3±8.12×10-6 nmol·h-1·mg（Pro-1，经统计学处理表明，对于HepG2完整细胞和细胞质，阴性对照组和龙葵碱组的K_m没有差异，而V_max差异显著。结论 龙葵碱是HepG2细胞NAT1酶的非竞争性抑制剂。龙葵碱通过作用于NAT1与PABA结合位点以外的其他位点抑制NAT1酶的活性而诱导HepG2细胞凋亡。

Study on the Effect of Solanine on N-acetyltransferase 1 Activity in HepG2 Cell

OBJECTIVE To explore the relationship between N-acetyltransferase 1 activity and apoptosis inducing by solanine in HepG2 cell.METHODS The speed of PABA acetylation reaction mediated by NAT1 was teken as the indicator of the activity of NAT1 in intact HepG2 cells and their cytoplasm.HPLC was employed to determine the concentration of AC-PABA,the effects of different concentrations of solanine and time on the intact HepG2 cell or cytoplasm were investigated.Taking 1/S(the recip of PABA concentration) and 1/V(...