Wnt／β-catenin信号通路参与高渗条件下气道上皮细胞黏液高分泌

目的研究高渗刺激对人气道上皮细胞（16HBE）黏蛋白（MUC）5AC分泌的影响，以及Wnt／β-catenin信号通路可能的介导作用。方法使用浓氯化钠配置高渗培养液，用高渗培养液刺激16HBE细胞，细胞分为常规培养（阴性对照组）以及高渗培养液刺激3、6、9、12h组。ELISA法检测MUC5AC分泌量，Westernblotting法检测人气道Wnt家族蛋白Wnt1、Wnt2、Wnt3a、Wnt4、Wnt5a、Wnt7a、Wnt10a、Wnt10b的表达情况。将Wnt4小片段siRNA转染16HBE细胞，再给予高渗培养液刺激。采用ELISA法检测培养上清的MUC5AC分泌量，采用Westernblotting法检测细胞内经典Wnt／β-catenin通路相关信号分子的表达量，细胞免疫荧光法检测核因子（NF）-κBp65核转位情况。结果高渗培养的16HBE细胞上清及胞质中检测到的MUC5AC分泌量显著高于阴性对照组，且MUC5AC分泌量在一定范围内呈时间依赖性（均P〈0．05）。高渗刺激组Wnt1、Wnt2、Wnt3a、Wnt5a、wnt7a、Wnt10a和Wnt10b表达量较阴性对照组无明显变化（均P〉0．05），而Wnt4表达量显著升高（P〈0．05）。高渗刺激组细胞内β-catenin和CyelinD1的相对表达量显著高于阴性对照组，细胞免疫荧光法提示NF-κBp65核转位（均P〈0．05）；而经转染Wnt4siRNA后，高渗培养组上清及胞质内MUC5AC分泌量显著低于未转染的高渗培养组（P〈0．05），细胞内β-catenin、CyclinD1水平及NF-κBp65的核转位现象也受到显著抑制（均P〈0．05）。结论高渗盐水可诱导16HBE细胞MUC5AC高分泌，Wnt／β-catenin信号通路在该效应中有重要的参与作用。