| PTD-SH2融合蛋白的原核表达和纯化 |
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| 引用本文： | 邱波,马庆久,鲁建国,阴继凯,李金茂,王青. PTD-SH2融合蛋白的原核表达和纯化[J]. 医学争鸣, 2007, 28(5): 421-424 |
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| 作者姓名： | 邱波 马庆久 鲁建国 阴继凯 李金茂 王青 |
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| 作者单位： | 第四军医大学唐都医院普外科,陕西,西安,710038;第四军医大学唐都医院普外科,陕西,西安,710038;第四军医大学唐都医院普外科,陕西,西安,710038;第四军医大学唐都医院普外科,陕西,西安,710038;第四军医大学唐都医院普外科,陕西,西安,710038;第四军医大学唐都医院普外科,陕西,西安,710038 |
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| 摘 要： | 目的:构建含SH2与蛋白转导结构域(PTD)融合基因片段的重组表达载体,在大肠杆菌中进行表达并纯化蛋白. 方法: 通过PCR方法扩增出SH2基因,克隆入pMD-18T载体,进行测序分析,将该基因亚克隆入原核表达载体pET-16b中PTD 的下游构建重组质粒pET-16b-PTD-SH2,转化感受态细胞BL21(DE3),经IPTG诱导表达重组融合蛋白,对表达产物进行SDS-PAGE电泳和Western blot检测分析,将已表达的蛋白质通过Ni-NTA亲和色谱柱进行纯化. 结果:构建了重组融合表达质粒pET-16b-PTD-SH2, 表达的融合蛋白经SDS-PAGE分析,在约Mr为15×103处出现了一条新生的蛋白条带,经灰度扫描检测,表达量约占菌体总蛋白的16%, 可溶性分析发现融合蛋白主要以包涵体形式存在,纯化后得到了目的蛋白. 结论: 成功构建了PTD-SH2的重组表达载体,使融合蛋白在E. coli DE3中高效表达,亲和层析后获得了纯化目的蛋白,为后续的SH2结构域的功能研究奠定了基础.
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| 关 键 词： | SH2基因 融合蛋白 表达 纯化 pET-16b载体 |
| 文章编号： | 1000-2790(2007)05-0421-04 |
| 修稿时间： | 2006-08-24 |
Prokaryotic expression and purification of PTD-SH2 fusion protein |
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| QIU Bo,MA Qing-Jiu,LU Jian-Guo,YIN Ji-Kai,LI Jin-Mao,WANG Qing. Prokaryotic expression and purification of PTD-SH2 fusion protein[J]. Negative, 2007, 28(5): 421-424 |
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| Authors: | QIU Bo MA Qing-Jiu LU Jian-Guo YIN Ji-Kai LI Jin-Mao WANG Qing |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | SH2 fusion proteins expression purification pET-16b vector |
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