| 人BDNF和GFP基因共表达慢病毒载体的构建及神经干细胞转染 |
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| 引用本文： | 刘勇,陈二涛,冯东福,刘天津,汪洋,潘栋超.人BDNF和GFP基因共表达慢病毒载体的构建及神经干细胞转染[J].上海交通大学学报(医学版),2008,28(10). |
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| 作者姓名： | 刘勇 陈二涛 冯东福 刘天津 汪洋 潘栋超 |
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| 作者单位： | 上海交通大学医学院第三人民医院神经外科，中国科学院上海细胞生物学研究所，复旦大学上海医学院解剖与组织胚胎学系 |
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| 摘 要： | 目的构建人脑源性神经营养因子(hBDNF)与绿色荧光蛋白(GFP)共表达的慢病毒载体并转染神经干细胞(NSCs)。方法运用基因重组技术,将hBDNF基因连接到带GFP的慢病毒表达载体pWPXL-MOD(pWPXL-GFP-IRES-GFP)中,构建慢病毒载体pWPXL-hBDNF-IRES-GFP,MluⅠ、EcoRⅠ双酶切反应及测序分析加以鉴定。将慢病毒载体主体质粒pWPXL-hBDNF-IRES-GFP、包装质粒HELPER和包膜质粒VSVG共转染293T细胞,包装慢病毒载体并测定滴度。将构建的pWPXL-hBDNF-IRES-GFP感染NSCs,并对感染细胞进行鉴定及分化活性检测。结果构建的慢病毒载体pWPXL-hBDNF-IRES-EGFP经MluⅠ和EcoRⅠ双酶切反应鉴定正确;测序分析证实与Genbank报道的hBDNF基因序列完全一致。三质粒共转染293T细胞后,荧光显微镜下可见大量绿色荧光。包装后慢病毒测定滴度为0.1×109~1×109TU/mL。pWPXL-hBDNF-IRES-GFP感染后的NSCs表达绿色荧光,可在体外扩增,NSCs细胞标志物巢蛋白表达阳性;细胞贴壁后可分化为神经元和胶质细胞。结论成功构建hBDNF与GFP基因共表达的慢病毒载体并转染NSCs,转染后细胞仍能保持已知的原有生物学特性及良好的分化活性。
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| 关 键 词： | 脑源性神经营养因子 绿色荧光蛋白 转染 慢病毒 |
Construction of bicistronic lentivirus vectors carrying hBDNF and GFP genes and transfection of neural stem cells |
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| LIU Yong,CHEN Er-tao,FENG Dong-fu,LIU Tian-jin,WANG Yang,PAN Dong-chao.Construction of bicistronic lentivirus vectors carrying hBDNF and GFP genes and transfection of neural stem cells[J].Journal of Shanghai Jiaotong University:Medical Science,2008,28(10). |
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| Authors: | LIU Yong CHEN Er-tao FENG Dong-fu LIU Tian-jin WANG Yang PAN Dong-chao |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | brain-derived neurotrophic factor green fluorescent protein transfection lentivirus |
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