石蜡分隔的热启动PCR技术扩增血清HBV-DNA

将聚合酶链反应（ＰＣＲ）成份分两组。先加一组含ｄＮＴＰｓ、引物和ＭｇＣｌ２，并加１粒组织切片用石蜡凝固为盖层。再加另一组反应液含待扩增模板、ＴａｑＤＮＡ聚合酶和ＫＣｌ，以与第一组反应液分隔。ＰＣＲ循环时高温可使中隔蜡层融化，两组反应液相混，蜡油上浮作为防蒸发屏障。由此避免室温混合加样和预置导致引物聚体形成和错导非特异扩增，提高ＰＣＲ特异性和灵敏性。作者应用这一技术检测５３例单项抗ＨＢｃ阳性血清，检出ＨＢＶＤＮＡ１３例，检测６９例ＨＢｓＡｇ阳性和抗ＨＢｅ阳性血清，检出ＨＢＶＤＮＡ６１例。而同样样本用标准ＰＣＲ检测，ＨＢＶＤＮＡ阳性分别为１０例和５２例。两种方法对ＨＢｓＡｇ和抗ＨＢｃ双阳性血清的ＨＢＶＤＮＡ检出率差别有显著意义（Ｐ＜０．０５）。