| AIDS患者合并感染耶氏肺孢子虫的巢式PCR检测及ITS基因的克隆测序 |
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| 引用本文： | 林睿,黎学铭,张陆娟,秦英梅,张鸿满,欧阳颐,黄绍标,江河. AIDS患者合并感染耶氏肺孢子虫的巢式PCR检测及ITS基因的克隆测序[J]. 应用预防医学, 2009, 15(4): 198-202 |
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| 作者姓名： | 林睿 黎学铭 张陆娟 秦英梅 张鸿满 欧阳颐 黄绍标 江河 |
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| 作者单位： | 广西壮族自治区疾病预防控制中心,南宁,530028;广西南宁市第四人民医院,南宁,530023 |
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| 基金项目： | 广西科学研究与技术开发计划课胚，广西留学回国人员科技活动择优资助项目 |
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| 摘 要： | 目的 探讨ITS巢式PCR检测AIDS患者合并耶氏肺孢子虫感染的应用价值并对ITS1-5.8S rDNA-ITS2基因进行克隆测序.方法 收集AIDS患者痰液标本,用二硫苏糖醇(DTT)消化处理后进行六亚甲基四胺银(CMS)染色镜检;提取肺孢子虫DNA后进行巢式PCR扩增,选取GMS染色和PCR同时阳性的112号和仅PCR阳性的185、200号病例的PCR产物进行TA克隆、测序,然后用Blastn程序和DNANAN软件对所测序列进行同源性比较和序列间比对,并和GenBank登录的耶氏肺孢子虫ITS1-5.KS rDNA-ITS2序列进行比较分析.结果 用ITS巢式PCR法检测AIDS患者99例,耶氏肺孢子虫DNA阳性43例,阳性率为43.4%(43/99),用GMS染色法检测,阳性率为4.04%(4/99),两者比较,有非常显著性差异(P<0.01).TA克隆112、185、200号病例的耶氏肺孢子虫ITS1-5.8S rDNA-ITS2基因序列长度分别为523bp、515bp、51lbp,三者之间的基因同源性为95%～97%,与GenBank登录的耶氏肺孢子虫(U07220)、(U07221)、(U07222)和(U07226)的ITS1-5.8S rDNA-ITS2基因的同源性为95%～98%,其变异位点多在ITS1和ITS2基因片段.结论 ITS巢式PCR法检测耶氏肺孢子虫敏感性明显高于GMS染色法.ITS巢式PCR法可作为肺孢子虫肺炎早期诊断方法,尤其适用无创性标本的检测,CMS染色法对无创性标本痰液的检测敏感性低,在临床上意义不大;成功获取广西株耶氏肺孢子虫ITS1-5.8S rDNA-ITS2的基因序列,与GenBank登录的外国株耶氏肺孢子虫基因序列高度同源,其中5.8S rDNA高度保守,ITS1和ITS2基因变异较大.
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| 关 键 词： | AIDS 耶氏肺孢子虫 内转录间隔区(ITS) 巢式PCR |
Nested PCR and clone sequencing of ITS gene of Pneumocystis jiroveeii isolated from AIDS patients |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | AIDS |
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