猪胰岛细胞异种移植激活立即经血液介导炎症反应的体外模型构建

背景:胰岛移植中,胰岛移植物的早期大量丢失是由于立即经血液介导的炎症反应损伤所致.要深入研究立即经血液介导的炎症反应的机制和抑制方法,稳定和标准化的立即经血液介导的炎症反应体外模型是不可或缺的研究平台.目的:观察成体猪胰岛移植物在异种移植体外模型中激活立即经血液介导炎症反应的表现,探索一种异种细胞移植立即经血液介导的炎症反应体外模型的稳定建模方法.设计、时间及地点:体外对比观察实验,于2008-01/11在中南大学湘雅三医院细胞移植与基因治疗中心实验室完成.材料:新鲜全血来源于体检血型为O型的健康志愿者,分为空白组、对照组、实验组.湖南沙子岭猪由中南大学湘雅医学院动物部提供.方法:以酶消化法结合密度梯度离心法分离纯化胰岛细胞.将5 000胰岛当量和10 000胰岛当量成年猪胰岛分别与实验组人新鲜全血混合加入肝素化的管道,使Loops管内新鲜血液中肝素的最终质量浓度分别为0.001,0.01,0.02 g/L.Loops管固定于钟摆式摇床中摇摆5,10,60 min模拟血液在体内血管的流动.空白组健康人新鲜全血抽出后立即作检测,对照组健康人新鲜全血7mL混合100μL培养液摇摆60min.主要观察指标:检测血常规、血液中人补体片段、人末端补体复合物、凝血酶抗凝血酶复合物、血小板球蛋白的变化,称凝血块的质量,并对其行苏木精-伊红染色病理检测.结果:Tubing Loops内肝素质量浓度为0.001 g/L时对新鲜全血的正常生理功能影响最小,可以长时间模拟体内血液生理功能不变.血液样本加入成体猪胰岛以后,10 000胰岛当量实验组于10 min开始出现了血凝块,随时间的延长,凝血块逐渐增大,Tubing Loops管中血液的血小板数量随时间延长而减少,血小板球蛋白、凝血酶抗凝血酶复合物、血浆中人补体片段、人末端补体复合物明显增加,淋巴细胞、单核细胞被大量消耗,较5000胰岛当量实验组变化明显.血凝块病理学检测显示,胰岛细胞周围被血栓包围,其周边及血栓内均可见中性自细胞浸润,胰岛移植物表面包膜被破坏,出现裂解征象.结论:采用10 000胰岛当量成年猪胰岛加至健康人新鲜全血的内表面0.001 g/L肝素化管道,固定于钟摆式摇床中可以建立稳定、标准化的立即经血液介导的炎症反应体外模型.

Establishment of an immediately blood-mediated inflammatory reaction model activated by porcine islet xenotransplantation in vitro