EV71外壳蛋白表位肽多克隆抗血清的制备及鉴定

目的 制备肠道病毒71型(EV71)外壳蛋白表位肽多克隆抗血清。方法 利用5种B细胞表位预测软件对EV71外壳蛋白进行分析，设计针对病毒蛋白(VP)的4种表位肽，即VP1(aa.204-223)、VP2(aa.133-163)、VP3(aa.139-148+aa.173-191)和VP4(aa.1-23),化学合成后与钥孔虫戚血蓝蛋白(KLH)偶联得到相应肽。然后，分别联合MF59/CpGC274佐剂皮下免疫BALB/c小鼠6次，间隔2周，采集血清，用ELISA和Western blot对其抗体活性进行分析。结果 4种抗血清均可有效结合EV71病毒和其变性病毒，VP2抗血清与变性病毒的结合活性较高，其余3种与病毒及变性病毒的结合力相当；而且4种抗血清均可与病毒样颗粒(VLP)及变性VLP结合。VP1和VP2抗血清分别与EV71 VLP中的组成蛋白VP1和VP0(VP2和VP4前体蛋白)结合，其中VP2抗血清的结合活性最好，VP1抗血清次之；同时，VP1和VP2抗血清还可与EV71病毒特异性高效结合，且VP2抗血清可同时结合EV71病毒的空心颗粒的VP0及实心颗粒的VP2。VP3和VP4...