| bcl-2 RNAi表达载体的构建、鉴定及其对Raji细胞的干扰效果 |
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| 引用本文： | 秦陈浩,申咏梅,宋妙丽,冯萍.bcl-2 RNAi表达载体的构建、鉴定及其对Raji细胞的干扰效果[J].苏州大学学报(自然科学版),2009,29(3). |
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| 作者姓名： | 秦陈浩 申咏梅 宋妙丽 冯萍 |
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| 作者单位： | 秦陈浩,冯萍(苏州大学附属第二医院检验科,江苏苏州,215004);申咏梅,宋妙丽(苏州大学附属第二医院放射免疫中心,江苏苏州,215004) |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项H，江苏省自然科学基金资助项目，苏州市科教兴卫青年科技项目 |
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| 摘 要： | 目的 构建bcl-2特异性RNAi真核细胞质粒表达载体,并研究其对B细胞淋巴瘤Raji细胞的干扰效果.方法 根据GenBank提供的bcl-2 cDNA序列,设计并合成两对短发夹结构的互补DNA序列,经退火形成互补双链,克隆至载体pGenensil-1构建重组质粒,予以酶切和DNA测序鉴定.脂质体介导重组质粒转染Raji细胞,采用RT-PCR法观察重组质粒对bcl-2 mRNA表达的影响,流式细胞仪测定细胞凋亡.结果 酶切及测序鉴定表明,成功构建bcl-2 shRNA的质粒表达载体pGenesil-1-bcl-2-544和pGenesil-1-bci-2-1009.转染Raji细胞48 h后,RT-PCR结果显示Raji细胞中bcl-2 mRNA表达分别下调了(31.95±3.02)%和(47.57±2.88)%,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪检测结果显示Raji细胞凋亡率分别为(14.25±0.84)%和(11.96±0.79)%,明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 成功构建bcl-2特异性RNAi真核细胞质粒表达载体,它能有效沉默bcl-2基因在B细胞淋巴瘤中的表达并促进B细胞淋巴瘤Raji细胞凋亡.
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| 关 键 词： | B细胞淋巴瘤 Raji细胞 pGenesil-1载体 |
Construction, Identification of Bcl-2 RNAi Expression Plasmid and Interference Effects on Raji Cells |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | RNAi bcl-2 |
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