幽门螺杆菌Ⅳ型分泌系统cagM基因的克隆、表达及抗体制备

目的:构建表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H.pylori) NCTC 11637 IV型分泌系统cagM(HP0537)全长编码基因的原核表达载体,分析其抗原性并制备抗体.方法:应用PCR技术从H.pylori基因组扩增 cagM基因片段,TA克隆后测序分析,并构建表达载体pET-28a(+)-cagM,转化 E.coli BL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE及鉴定表达蛋白,表达蛋白以 Ni2+-NTA 柱进行纯化,用软件分析其抗原性后,免疫家兔制备多克隆抗体,ELISA检测多克隆抗体效价.结果:测序结果表明cagM基因全长1 131 bp(基因库登录号为GU269568),编码376个氨基酸,与基因库中已知菌株J99,26695和G27的氨基酸同源性为98%～99%;诱导表达后经SDS-PAGE检测表明,在43 700处发现一条新生条带,Ni2+-NTA柱纯化后为单一条带,软件分析表明其抗原性较强,免疫家兔制备的多克隆抗体效价为1∶ 1.6×105.结论:首次成功克隆并表达了H.pylori pNCTC 11637 cagM基因,并制备了其抗体,为以后进一步研究其生物学功能以及H.pylori相关疾病的检测与治疗奠定了基础.