基于高通量测序技术研究补骨脂宁对A549细胞基因表达影响

目的 探索补骨脂宁治疗肺癌的潜在分子机制.方法 MTT法检测补骨脂宁对A549细胞增殖的影响;不同浓度的补骨脂宁干预细胞后,利用高通量测序技术检测细胞内基因的表达水平,筛选出差异表达的基因,并用STEM软件进行趋势分析,同时对差异基因进行GO功能注释和KEGG通路富集分析;进一步利用RT-PCR对测序所得到的差异基因结果进行验证,并探讨补骨脂宁治疗肺癌的可能机制.结果 MTT实验表明补骨脂宁IC50为46μmol/L,使用补骨脂宁可明显抑制A549细胞的增殖,且呈剂量依赖型;趋势分析表明测序所得到的4364个差异表达基因分别聚类在20个基因表达模式中,其中4个基因表达模式均为显著下调趋势,说明补骨脂宁通过抑制相关基因的表达,发挥抗增殖的作用,并且随着补骨脂宁浓度的增加,下调基因也随之增加,细胞增殖趋势越加减弱;进一步将40μM的补骨脂宁干预组与空白组的表达基因进行比较,共筛选出278个差异表达基因,GO分子功能结果显示,补骨脂宁主要调节细胞和代谢的过程,KEGG通路富集结果显示,补骨脂宁主要通过类固醇生物合成、脂肪酸代谢、不饱和脂肪酸的生物合成、酮体的合成与降解和类固醇激素的合成通路发挥作用,RT-PCR验证证明补骨脂宁可以调节脂质代谢的相关基因,抑制LSS、SCD、HMGCS1的mRNA表达,升高ANGPTL4的mRNA表达,与测序结果基本一致.结论 补骨脂宁主要通过靶向脂质代谢途径相关的代谢因子,抑制A549细胞增殖,从而达到治疗肺癌的作用.

Effects of corylin on gene expression of A549 cells based on high-through-put sequencing technology