| 中国麻疹野病毒基因型快速诊断方法的建立 |
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| 引用本文： | 周剑惠 陈超 刘桂艳 许强 张燕 朱贞 张运祥 田鑫 曹凤瑞 宋和 徐羽迪 王兆南 于瑞兰 徐力 中山哲夫 许文波. 中国麻疹野病毒基因型快速诊断方法的建立[J]. 中国疫苗和免疫, 2004, 10(6): 366-370 |
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| 作者姓名： | 周剑惠 陈超 刘桂艳 许强 张燕 朱贞 张运祥 田鑫 曹凤瑞 宋和 徐羽迪 王兆南 于瑞兰 徐力 中山哲夫 许文波 |
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| 作者单位： | 周剑惠（吉林省疾病预防控制中心,长春,130021） 陈超（吉林省疾病预防控制中心,长春,130021） 刘桂艳（中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,北京,100050） 许强（吉林大学生命科学学院,长春,130023） 张燕（中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,北京,100050） 朱贞（中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,北京,100050） 张运祥（吉林省疾病预防控制中心,长春,130021） 田鑫（吉林省疾病预防控制中心,长春,130021） 曹凤瑞（吉林省疾病预防控制中心,长春,130021） 宋和（长春市绿园区疾病预防控制中心,吉林,长春,130062） 徐羽迪（长春市绿园区疾病预防控制中心,吉林,长春,130062） 王兆南（长春市朝阳区疾病预防控制中心,吉林,长春,130021） 于瑞兰（长春市朝阳区疾病预防控制中心,吉林,长春,130021） 徐力（吉林大学生命科学学院,长春,130023） 中山哲夫（日本北里生命科学研究所,东京,108-8641） 许文波（中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,北京,100050） |
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| 基金项目： | 川医学奖学金同学会科研启动基金资助项目 (0 80 ) |
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| 摘 要： | 研究建立了一种适用于中国现流行麻疹野病毒基因型的基因型别筛查、定型的分析方法,即逆转录-聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性分析(RT-PCR-RFLP).首先对RT-PCR方法的敏感性和特异性进行了实验证明,对11株麻疹病毒提取核糖核酸(RNA),逆转录套式PCR扩增后全部出现阳性特异条带.在同样的反应条件下,扩增6种不同基因型麻疹病毒9株,同时又扩增其它非麻疹病毒.结果9株6种基因型麻疹病毒RT-PCR均呈现阳性条带,说明本研究采用的RT-PCR方法敏感.而非麻疹病毒RT-PCR结果为阴性,均未见阳性条带,说明该RT-PCR方法特异.根据H1和H2基因型麻疹病毒分别被不同的限制性内切酶SalⅠ和BamHⅠ切割成不同大小的基因片段,建立RFLP快速基因定型方法.之后,对建立的RFLP方法的特异性和敏感性进行了实验证明.利用该方法对吉林省连续两年分离到的9株麻疹野病毒[已经过中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家麻疹实验室脱氧核糖核酸(DNA)序列分析证实为H1基因型]进行验证,结果均为H1基因型麻疹病毒,证实该PCR-RFLP结果与序列分析结果一致,也说明该方法敏感.同时,又对7种不同基因型麻疹病毒应用PCR-RFLP方法进行实验,结果只有H1和H2基因型麻疹病毒被限制性内切酶SalⅠ和BamHⅠ分别切成2个不同大小的基因片段,其它基因型麻疹病毒由于无SalⅠ和BamHⅠ酶的切位点,所以未被切开,说明所建立的PCR-RFLP方法特异,只针对中国流行的麻疹病毒基因型.研究证明,RFLP是一种快速、简便又经济实用的麻疹病毒基因定型筛查方法.
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| 关 键 词： | 麻疹病毒 逆转录聚合酶链反应 限制性内切酶片段长度多态性分析 电泳 序列分析 敏感性 特异性 |
| 文章编号： | 1006-916X(2004)06-0366-05 |
| 修稿时间： | 2004-09-21 |
Establishment of a Rapid Dagnostic Method for Genotyping Measles Virus |
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