| 利用RNAi技术抑制结肠癌NRF2基因表达 |
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| 引用本文： | 杨晓云,李延青,袁俊华,郭玉婷,张燕,朱强.利用RNAi技术抑制结肠癌NRF2基因表达[J].基础医学与临床,2006,26(10):1072-1077. |
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| 作者姓名： | 杨晓云 李延青 袁俊华 郭玉婷 张燕 朱强 |
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| 作者单位： | 山东大学,齐鲁医院,消化内科,山东,济南,250012;山东大学,齐鲁医院,消化内科,山东,济南,250012;山东大学,齐鲁医院,消化内科,山东,济南,250012;山东大学,齐鲁医院,消化内科,山东,济南,250012;山东大学,齐鲁医院,消化内科,山东,济南,250012;山东大学,齐鲁医院,消化内科,山东,济南,250012 |
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| 摘 要： | 目的构建RNA干扰真核表达载体pSUPER-NRF2,并在结肠癌细胞中进行表达,验证NRF2基因表达是否受到抑制。方法设计特异性针对NRF2基因的寡核苷酸序列及相应的对照序列,分别构建重组载体并转染人结肠癌Caco-2细胞。同时转染pEGFP-N1质粒,通过荧光显微镜观察及流式细胞仪检测绿色荧光来监测转染效率,共转染pEGFP-N1 48 h后G418筛选稳定表达的细胞。利用RT-PCR和W estern b lot检测瞬时及稳定转染细胞NRF2基因的表达。结果成功构建RNA i真核表达载体。转染pEGFP-N1后48 h达转染效率高峰。瞬时及稳定转染pSUPER-NRF2-A2、B2重组质粒NRF2 mRNA的表达无差异;转染48 h后,pSUPER-NRF2-A1、B1可显著抑制NRF2 mRNA的表达;pSUPER-NRF2-B1稳定转染后,NRF2 mRNA的表达也显著降低。瞬时和稳定筛选后NRF2蛋白表达亦显著降低。结论成功构建了NRF2的RNA i表达载体,可有效抑制靶基因表达,共转染带有筛选标记的pEGFP-N1质粒,筛选可获得低表达NRF2的稳定克隆,为进一步研究NRF2在结肠癌发生、发展中的作用提供了重要的实验材料。
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| 关 键 词： | NRF2 服RNA干扰 基因表达 结肠癌 |
| 文章编号： | 1001-6325(2006)10-1072-06 |
| 收稿时间： | 2005-08-30 |
| 修稿时间： | 2006-04-03 |
Inhibition of NRF2 expression by RNAi in Caco-2 cells |
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| YANG Xiao-yun,LI Yan-qing,YUAN Jun-hua,GUO Yu-ting,ZHANG Yan,ZHU Qiang.Inhibition of NRF2 expression by RNAi in Caco-2 cells[J].Basic Medical Sciences and Clinics,2006,26(10):1072-1077. |
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| Authors: | YANG Xiao-yun LI Yan-qing YUAN Jun-hua GUO Yu-ting ZHANG Yan ZHU Qiang |
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| Institution: | Dept. Gastroterology, Qilu Hospital, Shandong University, Jinan 250012, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | NRF2 RNA interference gene expression colon cancer |
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