| 云南个旧肺鳞癌YTMLC-90细胞株cDNA文库构建和鉴定 |
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| 引用本文： | 李海红,马丽菊,王秦秦. 云南个旧肺鳞癌YTMLC-90细胞株cDNA文库构建和鉴定[J]. 细胞与分子免疫学杂志, 2004, 20(4): 465-468 |
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| 作者姓名： | 李海红 马丽菊 王秦秦 |
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| 作者单位： | 昆明医学院第一附属医院临床医学实验研究中心,云南,昆明,650032 |
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| 基金项目： | 国家“十五”科技攻关项目资助 (No .2 0 0 1BA70 3B1 1 ) |
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| 摘 要： | 目的 :构建云南个旧肺鳞癌YTMLC 90细胞株的cDNA文库。方法 :从培养的人肺鳞癌YTMLC 90细胞株中提取总RNA ,利用经修饰的oligo(dT)引物 (含SfiⅠB酶切位点 )合成cDNA第1链。同时 ,根据真核生物mRNA 5′端帽子结构的特点 ,利用SMART核苷酸 (含SfiⅠA酶切位点 )作为cDNA第 1链在mR NA 5′端延伸出去的模板。以此序列为引物 ,利用LD PCR(long distancePCR)合成双链cDNA。双链cDNA经SfiⅠ (ⅠA和ⅠB)酶切和过柱分级分离后 ,克隆入经SfiⅠ酶切的载体λTripIE× 2 ,经体外包装即为cDNA文库。结果 :人肺癌细胞株YTMLC 90的cDNA文库中 ,含有 1.0 1× 10 9pfu/L个重组子 ,重组率为 93.2 %。将该文库扩增后 ,克隆数可达 5 .2 4× 10 12 pfu/L ,插入cDNA的长度为 75 0～ 30 0 0bp。结论 :所构建的cDNA文库具有较好的质量 ,为进一步筛选、克隆肺癌特异性表达基因奠定了基础。
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| 关 键 词： | 肺癌 cDNA文库 构建 鉴定 |
| 文章编号： | 1007-8738(2004)04-0465-04 |
| 修稿时间： | 2003-07-26 |
Construction and characterization of cDNA library for lung cancer cell line YTMLC-90 isolated from Gejiu,Yunnan province |
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| LI Hai-hong,MA Li-ju,WANG Qin-qin Reseach Center of Medical Experiment,First Affiliated Hospital of Kunming Medical College,Kunming ,China. Construction and characterization of cDNA library for lung cancer cell line YTMLC-90 isolated from Gejiu,Yunnan province[J]. Chinese journal of cellular and molecular immunology, 2004, 20(4): 465-468 |
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| Authors: | LI Hai-hong MA Li-ju WANG Qin-qin Reseach Center of Medical Experiment First Affiliated Hospital of Kunming Medical College Kunming China |
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| Affiliation: | Reseach Center of Medical Experiment, First Affiliated Hospital of Kunming Medical College, Kunming 650032, China. |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | lung cancer cDNA library construction identification |
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