| 细粒棘球蚴cDNA文库的构建和免疫筛选 |
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| 引用本文： | 朱慧慧,许学年,高春花,汪俊云,杨玥涛,石锋,焦伟,付承. 细粒棘球蚴cDNA文库的构建和免疫筛选[J]. 国际医学寄生虫病杂志, 2012, 39(5): 272-275 |
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| 作者姓名： | 朱慧慧 许学年 高春花 汪俊云 杨玥涛 石锋 焦伟 付承 |
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| 作者单位： | 1. 200025上海,中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所,卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室,世界卫生组织疟疾,血吸虫病和丝虫病合作中心
2. 新疆疾病预防控制中心,乌鲁木齐,830001 |
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| 基金项目： | 国家科技重大专项，科技支疆课题 |
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| 摘 要： | 目的 构建细粒棘球蚴原头节的λZAPⅡcDNA文库,并对构建的文库进行免疫筛选.方法 采集感染细粒棘球蚴的绵羊育囊中的原头节,用Trizol试剂抽提总RNA,用mRNA纯化试剂盒纯化mRNA作为模板合成cDNA,并对其进行末端平端化、EcoR Ⅰ接头连接和磷酸化及Xho Ⅰ酶切,然后应用Sepharose CL-2B分离柱对其进行分级分离,收集大于500 bp的cDNA片段,使用GigapackⅢGold试剂盒将合成的cDNA连接到λZAP-Ⅱ载体,并将重组载体包装到λZAP-Ⅱ噬菌体中,构建细粒棘球蚴cDNA文库.用囊型棘球蚴病患者混合血清对所构建的文库进行免疫筛选,并用NCBI中的Blast模块及其它生物信息软件对筛选出的阳性克隆进行生物信息学分析.结果 成功构建了细粒棘球蚴原头节λZAPⅡcDNA文库,文库的滴度为1.8 ×105噬菌斑形成单位(plaque forming unit,pfu)/ml,插入片段长度范围在1.0～4.0 kb间,平均插入片段长度为2.6 kb,插入效率为93.8％.对所构建的文库进行免疫筛选,共筛选到5个阳性克隆,其中有2个为细粒棘球蚴新发现基因,新发现基因存在众多B细胞表位.结论 成功构建了细粒棘球蚴原头节λZAPⅡcDNA文库,初步免疫筛选得到2个新发现基因,生物信息学分析预测它们具有潜在的诊断价值.
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| 关 键 词： | 细粒棘球蚴 原头节 cDNA文库 免疫筛选 |
Construction and immunoscreening of cDNA library of Echinococcus granulosus |
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| ZHU Hui-hui , XU Xue-nian , GAO Chun-hua , WANG Jun-yun , YANG Yue-tao , SHI Feng , JIAO Wei , FU Cheng. Construction and immunoscreening of cDNA library of Echinococcus granulosus[J]. International JOurnal of Medical Parasitic Diseases, 2012, 39(5): 272-275 |
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| Authors: | ZHU Hui-hui XU Xue-nian GAO Chun-hua WANG Jun-yun YANG Yue-tao SHI Feng JIAO Wei FU Cheng |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Echinococcus granulosus Protoscolex cDNA library Immunoscreening |
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