| 正、反义β1,4半乳糖基转移酶-Ⅴ表达质粒的构建 |
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| 作者姓名： | 严美娟 程纯 邵晓轶 李爱红 张冬梅 |
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| 作者单位： | 南通大学基础医学院微生物学与免疫学教研室,江苏,226001;南通大学基础医学院微生物学与免疫学教研室,江苏,226001;南通大学基础医学院微生物学与免疫学教研室,江苏,226001;南通大学基础医学院微生物学与免疫学教研室,江苏,226001;南通大学基础医学院微生物学与免疫学教研室,江苏,226001 |
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| 基金项目： | 江苏省高校高新技术产业发展项目(JH02-117),江苏省高校自然科学研究项目(04KJB320114),江苏省社会发展科技指导性计划项目(BS2004526). |
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| 摘 要： | 目的探讨不同β1,4半乳糖基转移酶-Ⅴ(β-1,4-GalTV)表达水平的生物学意义,构建正、反义β-1,4-GalTV表达质粒.方法设计β-1,4-GalTV全长引物;提取小鼠脑总RNA,通过RT-PCR方法,得到全长β-1,4-GalTV基因片段,将其克隆到pGEM-T载体.再通过多克隆酶切位点,将β-1,4-GalTV全长序列克隆到pcD-NA 3.1表达载体中.设计反义引物,以pGEM-β-1,4-GalTV质粒为模板,将PCR产物克隆到pcDA3.1表达载体中.通过酶切和测序鉴定构建的质粒.结果通过酶切和测序证实,得到了正、反义β-1,4-GalTV表达质粒.结论正、反义β-1,4-GalTV表达质粒的构建,为进一步研究不同β-1,4-GalTV表达水平的生物学意义奠定基础.
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| 关 键 词： | β1 4半乳糖基转移酶-Ⅴ 逆转录-聚合酶链反应 正、反义表达质粒 |
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