摘 要: | 为研究Heymann肾炎致病原的病理表型和免疫复合物形成机理,应用DNA重组技术,将Heymann肾炎(HN)致病原受体相关蛋白(RAP)的cDNA克隆到表达质粒pGEX中,构建重组表达质粒pGEX-R93,经限制性内切酶图谱分析,DNA测序,鉴定插入子RAP-cDNA正确克隆到pGEX表达框架后,转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导,高效表达了谷胱甘肽巯基转移酶-受体相关蛋白(GST-RAP)融合蛋白,蛋白产量占大肠杆菌总蛋白量的39.4%。经GST-Sephose4B亲和层析得到高度纯化的GST-RAP。免疫印迹分析证明,针对GST-RAP的抗血清能特异地识别肾皮质天然抗原44000α蛋白,免疫组化分析显示GST-RAP抗血清特异性识别大鼠肾近曲小管刷状缘抗原。
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