分化型胚胎软骨发育基因1特异性小干扰RNA表达质粒的构建和鉴定 |
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作者姓名: | 魏 炎 郏雁飞 郑 燕 马晓丽 汪运山 |
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作者单位: | 1山东省医学科学院基础医学研究所,山东省济南市 250062
2山东大学附属济南市中心医院,山东省济南市 250013 |
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基金项目: | 济南市科技局科技计划项目(200905045-1),国家自然科学基金(81000869)资助项目。 |
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摘 要: | 背景:分化型胚胎软骨基因1可调控肿瘤生长、凋亡、衰老相关因子,与肿瘤的发生发展有着重要的联系。
目的:构建针对人分化型胚胎软骨基因1的小干扰RNA表达载体。
方法:从NCBI中查找人分化型胚胎软骨基因1基因全长mRNA序列,利用Katahdin提供的在线小干扰 RNA模板序列设计软件,设计针对分化型胚胎软骨基因1的2条shRNA 的 DNA 模板单链,合成靶向分化型胚胎软骨基因1基因转录可形成茎环结构的寡聚核苷酸,退火后与酶切后的pGreenPuro™ shRNA Cloning and Expression Lentivector质粒连接,在JM-109菌株中扩增,并进行质粒DNA琼脂糖凝胶电泳分析、紫外分光光度计检测、菌落PCR以及测序鉴定。
结果与结论:将含有分化型胚胎软骨基因1目标序列25 bp 的双链 DNA插入片段,连接到pGreenPuro™ shRNA Cloning and Expression Lentivector质粒形成重组质粒。质粒DNA琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计分析结果确认所提质粒纯度较高,可用于后续实验。菌落PCR结果表明产物大小约为170 bp,与预期相符。测序结果表明pGreenPuro™ shRNA Cloning and Expression Lentivector质粒已经插入人分化型胚胎软骨基因1的干扰合成片段,无碱基突变。成功构建了靶向分化型胚胎软骨基因1-小干扰 RNA表达载体。
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关 键 词: | 分化型胚胎软骨基因1 小干扰 RNA 构建 质粒 基因表达 |
收稿时间: | 2010-12-08 |
Construction and identification of small interfering RNA expression plasmid target to differentiated embryo-chondrocyte expressed gene 1 |
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Authors: | Wei Yan Jia Yan-fei Zheng Yan Ma Xiao-li Wang Yun-shan |
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Institution: | 1Institute of Basic Medicine, Shandong Academy of Medical Sciences, Jinan 250062, Shandong Province, China
2Jinan Central Hospital, Shandong University, Jinan 250013, Shandong Province, China |
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Abstract: | |
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Keywords: | |
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