Tat蛋白转导结构域介导HSV1-TK导入肝癌细胞及其效应

目的： 〖HT5"SS〗探讨HIV1编码的反式激活蛋白Tat与HSV1TK融合表达对肝癌细胞的杀伤效果。〖HT5W〗方法：〖HT5"SS〗 合成编码HIVTat47~57（Tat 11）的2条寡核苷酸单链,两端分别引入BamHⅠ和Hind Ⅲ 两个酶切位点,退火形成寡核苷酸双链,15%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳判断退火效果;以rpAs16Dr为模板,通过PCR扩增HSV1TK基因,定向克隆至原核表达载体pET32中。将含pET32cTat 11TK的BL21菌通过IPTG诱导表达,表达产物用Ni2+螯合柱亲和纯化,免疫组化分析重组蛋白Tat 11TK的膜结合特性,蛋白印迹技术分析该融合蛋白的穿膜能力,检测和分析TK/GCV、Tat 11TK/GCV对肝癌细胞株HepG2的杀伤作用。 〖HT5W〗结果〖HT5"SS〗： 表达产物SDSPAGE在相对分子质量60 700左右显示条带,符合Tat 11TK与表达标签融合蛋白的理论值,并证明以包涵体的形式表达;通过Ni2+螯合柱亲和纯化获得的Tat 11TK重组融合蛋白,经免疫组化证实能结合到肝癌细胞表面,蛋白印迹结果说明Tat 11TK能有效穿过细胞膜进入HepG2细胞内,同时应用低浓度前药更昔洛韦（GCV,150 μmol/L）能有效抑制HepG2细胞生长。〖HT5W〗结论〖HT5"SS〗： Tat 11TK在原核系统获得高效表达,具有较强的穿膜能力和前药酶活性。

Transfer domain of HIV-1 Tat mediates HSV-1 thymidine kinase into hepatic cancer cells: the mediating effect and efficacy