| 人抗凝血酶Ⅲ的表达及其抗血清的制备 |
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| 引用本文： | 卜澍,王洪梅,孙涛,刘文浩,王立群,何洪彬.人抗凝血酶Ⅲ的表达及其抗血清的制备[J].细胞与分子免疫学杂志,2013,29(2):174-177. |
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| 作者姓名： | 卜澍 王洪梅 孙涛 刘文浩 王立群 何洪彬 |
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| 作者单位： | 1. 东北农业大学生命科学学院,黑龙江哈尔滨150030;山东省农业科学院奶牛研究中心,山东济南250100
2. 山东省农业科学院奶牛研究中心,山东济南,250100
3. 东北农业大学生命科学学院,黑龙江哈尔滨,150030 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(31272586);国家转基因重大专项(2009ZX08007-006B,2011ZX08007-002,2011ZX08008-004);山东省青年自然科学基金(ZR2010ZR029);山东省自然基金(ZR2010CM012);济南市高校院所自主创新计划(201004027) |
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| 摘 要： | 目的 用大肠杆菌系统表达重组的抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ),制备其抗血清并测定效价.方法 利用基因克隆技术获得AT-Ⅲ基因片段,构建原核表达质粒pET32a(+)-AT-Ⅲ,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,IPTG诱导表达、蛋白纯化并免疫兔,间接ELISA、Western blot法检测抗血清.结果 SDS-PAGE、Western blot法检测原核表达蛋白结果显示,在相对分子质量(Mr)77 000附近出现特异性条带.对该融合蛋白进行分离纯化后免疫新西兰兔,制备AT-Ⅲ抗血清,间接ELISA方法检测抗血清的最高效价可达到1∶12 800,Western blot分析表明抗血清可与293T、CHO细胞表达的AT-Ⅲ蛋白及AT-Ⅲ蛋白纯品特异性结合.结论 成功制备了人抗凝血酶Ⅲ抗血清.
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| 关 键 词： | 抗凝血酶Ⅲ 原核表达 检测 抗血清 |
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